DNA-viruset från familjen Hepadnaviridae är det direkta orsaksmedlet för hepatit B. PCR-analys av hepatit B tillåter närvaron av ett infekterat DNA-virus att detekteras i patientens blod. Resultatet av en positiv typ på HBV-DNA visar närvaron av infektion i patientens blod. Det bör noteras att diagnosen genom användning av PCR-analys gör det möjligt att inte bara bestämma förekomst av infektion, men också dess kvantitativa belastning och aktivitet. Denna metod är pålitlig, korrekt och reproducerbar. Kvantifiering av HBV-DNA med qPCR kan användas för att övervaka effektiviteten av HBV-terapi och vara användbar för att förstå HBV: s naturhistoria i en endemisk area.
Infektionsprocessen med hepatit B uppstår genom inhemsk eller sexuell kontakt - genom direktkontakt med infekterat blod. Efter infektion kommer viruset i levercellerna, där det fortsätter sin aktiva reproduktion. Genom blodbanan sprider patogena celler genom kroppen. Det är värt att notera att hepatit B-celler är mycket resistenta mot syra och hög temperatur. Han kan bibehålla sina skadliga egenskaper i sex månader.
Typer av PCR för hepatit B
Hittills finns det två typer av diagnostik som föreskrivs om du misstänker förekomsten av hepatit B-virus: kvalitativ PCR (medger att du kan bestämma virusets närvaro i blodet med 100% noggrannhet) och kvantitativ PCR (gör det möjligt att bestämma graden av virusaktivitet).
PCR av hög kvalitet föreskrivs om det finns misstanke om HBV-infektion eller om andra diagnostiska metoder inte har givit några klara resultat. Denna typ av PCR-analys är extremt lätt att dechiffrera: negativ (inget virus detekterat i blodet), positivt (virus detekterat i blodet). Den huvudsakliga uppgiften med kvalitativ analys är att bestämma närvaron av infekterade celler i sjukdoms tidiga skeden. Om viruset diagnostiserades två veckor efter den påstådda infektionen, blir behandlingen effektivare mycket högre. Om viruset i blodet är ungefär två månader blir sjukdomen kronisk, därför kan den inte helt botas.
Om en kvalitativ diagnos bekräftar närvaron av HBV i blodet, föreskriver läkaren en kvantitativ analys.
Kvantitativ analys gör det möjligt att bestämma aktiviteten av virusutvecklingen i patientens kropp. Denna typ av PCR-analys tilldelas:
- att bestämma sjukdomsfasen
- att övervaka effektiviteten hos den applicerade terapin;
- att bestämma nivån på resistans hos viruset till ett visst läkemedel;
- för val av droger.
Kvantitativa indikatorer på viruset i blodet mäts i IE per milliliter eller DNA per milliliter.
Om läkaren föreskriver en kvantitativ diagnos omedelbart, utan att kontrollera den kvalitativa, anses 75 IE per milliliter vara normen. Om färre internationella enheter detekteras, är resultatet att HBV inte detekteras när siffrorna är över normala, förekomsten av viral hepatit B diagnostiseras.
Tolkning av kvantitativ diagnos
Följande indikatorer (i kopior / milliliter) anses vara norm för CRP i hepatit B: mindre än 10 3 - inaktivt virus; från 10 4 till 10 5 - viruset är vanligtvis inaktivt; 10 6 - aktivt virus; 10 7 - ett virus i ett högt aktivitetsstadium.
Baserat på kvantitativa indikatorer kan man med 100% noggrannhet bestämma sjukdomsformen (bärare, akut eller kronisk), reaktionen av viruset till behandling, behovet av ytterligare diagnostik.
Den kroniska formen av hepatit B fastställs om virusets aktivitet är 10 5 kopior per milliliter. En bärare diagnostiseras om poängen är under 10 5 kopior per milliliter.
Under behandlingsperioden är det nödvändigt att regelbundet (en gång var tredje månad) upprepa kvantitativ diagnostik för att i tid beakta perioden då viruset utvecklar immunitet mot de använda drogerna och ändrar metoden. Om alla studier har utförts korrekt och en effektiv behandling har valts kommer en upprepad analys (efter tre dagers behandling) att visa en minskning av aktiviteten hos patogena celler med minst 85%.
En leverbiopsi utförs endast i det fall då sex månaders behandling har visat att ALT-nivåerna är dubbelt så höga som vanliga och PCR-diagnostik visar frekvenser lägre än 10 5 kopior per milliliter blod.
Förbereder sig för undersökningen
Venös blod krävs för analys. För att få de mest exakta resultaten är det nödvändigt att förbereda för proceduren: vägra att ta mat minst åtta timmar före blodinsamlingen; i två dagar att vägra behandling med läkemedel (det är absolut nödvändigt att varna läkaren om att ta drogerna) du måste tillbringa tjugo minuter i viloläge innan du donerar blod; Tolv timmar före förfarandet, ge upp sportövningar, alkoholhaltiga drycker, röka och äta feta livsmedel.
Det är viktigt: om diagnosen är nödvändig för ett barn under fem månaders ålder, måste han ge ett glas kokt vatten var tionde minut sextio minuter före blodinsamlingsproceduren.
Sammanfattning
PCR-analys för hepatit B idag är den mest exakta metoden för att diagnostisera ett virus. Metoden gör det möjligt att bestämma de muterade och dolda formerna av sjukdomen, för att diagnostisera sjukdomen under de första infektionsdagarna, för att välja den mest effektiva behandlingen. Laboratorieassistenten jämför analysens resultat med normen, och tar sedan med sig slutsatsen. Uppgifterna behandlas inom två veckor. För att få en hänvisning till PCR-analys är det nödvändigt att kontakta en hepatolog, en smittsam specialist eller en virolog. Det är viktigt att komma ihåg att ju snabbare du kommer till doktorn, ju snabbare resultaten kommer att bli, desto effektivare blir behandlingen.
Kostnaden för blodprovning och PCR för hepatit C
Hepatit C är en inflammatorisk patologi där leverceller påverkas. Sjukdomen utvecklas som en följd av penetrationen av hepatit C-viruset (HVC) i människokroppen.
Formen av sjukdomen kan vara akut eller kronisk.
Oftast är symtomen på den akuta formen av patologi i de flesta patienter frånvarande, ibland är sjukdomen åtföljd av smärtsamma känslor i buken, minskad prestanda, ökad trötthet, aptitlöshet, mörk urinfärg, missfärgning av avföring, hudlindring och slemhinnor, ledsmärta. Sådana symptom uppträder vanligtvis 6-8 veckor efter infektion, men kan uppträda efter sex månader.
Vid utvecklingen av sådana fenomen är det nödvändigt att kontakta en medicinsk institution och genomgå en omfattande undersökning av hela organismen. Som en del av en medicinsk undersökning utförs ett blodprov för hepatit C.
Idag, med hjälp av moderna diagnostiska tekniker, kan denna patologi identifieras vid det inledande utvecklingsstadiet, vilket väsentligt ökar risken för en fullständig botning av sjukdomen.
Följande grupper av människor är skyldiga att testa för hepatit C:
- kvinnor under barnets barndom;
- personer med tecken på hepatit
- medicinsk personal;
- potentiella organ och blodgivare;
- drogmissbrukare, HIV-infekterade personer, promiskuösa intima liv.
Förteckning över obligatoriska studier
Vilka tester ska jag ta för hepatit C? För att noggrant diagnostisera sjukdomen, identifiera orsakerna och bestämma leverns parenchymstatus krävs följande studier:
- allmän urin och blodprov;
- biokemisk analys av blod;
- PCR-analys;
- blodprov för detektering av antikroppar mot HVC;
- blodprov för tillgängliga antikroppar mot sina egna leverceller;
- leverbiopsi.
Dekryptering av ett blodprov för hepatit C utförs av en specialist. Överväga varje metod för forskning mer detaljerat, liksom vi kommer att förstå vilken analys av hepatit C som är mest exakt.
Allmän analys
När du utför ett fullständigt blodantal för hepatit C kan du utvärdera patientens tillstånd. Förändringar i blodparametrar uppfattas inte som specifika symptom på hepatit, men med denna sjukdom finns det sådana sjukdomar som:
- koncentrationen av hemoglobin, blodplättar och leukocyter minskar
- ökar innehållet av lymfocyter;
- blodkoagulering bryts
- erytrocytsedimenteringshastigheten (ESR) ökar.
Allmän analys av urin gör det möjligt att upptäcka urobelin - ett gallpigment som uppträder i urinen som en följd av leverfunktionens nedsatta funktion.
Biokemisk analys
Biokemisk analys av blod i hepatit C gör det möjligt att identifiera sådana störningar som:
- förhöjda nivåer av leverenzymer (alanintransaminas - ALT och aspartataminotransferas - AST) som kommer in i blodet när hepatocyter är skadade. I normala fall bör dessa indikatorer för män inte vara över 37 IE / l, för kvinnor - inte högre än 31 IE // l. En ökad koncentration av ALT och AST i asymptomatisk hepatit C är ofta det enda symptomet på denna sjukdom. Dessutom ökar blodglutamyltranspeptidas alkaliska fosfatas (normalt inte högre än 150 IE / l).
- innehållet i bilirubin (både allmänt och direkt) i blodet överskrids. Om nivån på det gulliga pigmentet i serum överstiger 27-34 μmol / l uppstår gulsot (upp till 80 μmol / l i mild form, 86-169 μmol / l i måttligt svår, över 170 μmol / l i svår form).
- Nivået av albumin sänks, koncentrationen av gammaglobuliner ökar tvärtom. Gamma globuliner består av immunglobuliner - antikroppar som skyddar kroppen mot sjukdomsskadande ämnen.
- ökad koncentration av triglycerider i blodet.
PCR-test
Med hjälp av PCR-tekniken är det möjligt att diagnostisera orsakssjukdomens orsaksmedel. Genom att utföra denna analys kan man upptäcka ett virus i blodet, även om dess mängd är minimal. PCR-analys för hepatit C gör det möjligt att bestämma en befintlig infektion i blodet redan efter 5 dagar från infektionstillfället, det vill säga länge innan antikroppar uppträder.
Om resultatet av ett blodprov för hepatit C genom PCR är positiv, indikerar detta förekomsten av en aktiv infektion i kroppen. Med hjälp av denna metod kan du genomföra en kvalitativ och kvantitativ studie av HVC RNA.
Under den kvalitativa analysen av PCR för hepatit C är det möjligt att upptäcka ett befintligt virus i människokroppen.
Denna diagnostiska procedur utförs om anti-HVC detekteras i blodet.
Avkodning av analysen för hepatit C innehåller information om att en infektion antingen har detekterats eller inte detekterats i kroppen. Normalt finns inga patologiska ämnen i blodet.
Om hepatit C-testet är positivt betyder det att patogenen kontinuerligt delar upp och infekterar levercellerna.
Resultaten av denna analys kan vara opålitliga, det är möjligt i följande fall:
- använt förorenat biomaterial
- i närvaro av heparin i blodet;
- i närvaro av kemiska eller proteiner (hämmare) i det studerade biomaterialet, som påverkar elementen av PCR.
Kvantitativ analys av hepatit C ger information om den mängd virus som finns i blodet, det vill säga bestämmer virusbelastningen. Med detta begrepp menas volymen av HVC RNA närvarande i blodet (t ex i 1 ml). Vid tolkningen av den kvantitativa analysen av hepatit C uttrycks detta värde i digital ekvivalent, mätt i IE / ml.
Blod för PCR för hepatit C tas före terapeutiska åtgärder. Efter analys utförs vid 1, 4, 12 och 24 veckor. Studien vid vecka 12 är vägledande och utförs för att utvärdera effektiviteten av de terapeutiska förfarandena.
Om testet för hepatit C under graviditeten är positivt och virusvärdena överskrids ökar risken för överföring av patogener från den sjuka mamman till barnet flera gånger. Även med förhöjd viral belastning är genomförandet av terapeutiska åtgärder svårt.
Enligt transkriptionen av test för hepatit C, om virusbelastningsvärdena överstiger 800 000 IE / ml, är det högt. Om siffrorna ligger under 400 000 IE / ml, anses virusbelastningsgraden vara låg.
Analys av hepatit C genom PCR anses vara den mest exakta och har flera fördelar jämfört med andra forskningsalternativ, nämligen:
- direkt diagnos av sjukdoms orsakssamband. När man utför traditionella studier bestäms av närvaron av proteinmarkörer som är avfallsprodukter av patogener. Detta indikerar bara att infektionen är närvarande i blodet. Vid testning av hepatit C genom PCR är det möjligt att bestämma typen av patogen av farlig patologi.
- specificitet av tekniken. Under denna procedur bestäms en unik DNA-region i biomaterialet som motsvarar endast en typ av patogen. Detta minimerar sannolikheten för felaktiga resultat.
- hög känslighet. När du utför PCR-analys kan du upptäcka minsta mängd virus. Detta är viktigt om villkorligt patogena ämnen identifieras som endast utgör ett hot om deras nivå ökar.
- Vid användning av denna teknik i ett prov av biomaterial kan flera patogener detekteras samtidigt.
- kan upptäcka dolda infektioner. Dessutom möjliggör analysen dig att diagnostisera patogena mikroorganismer som lever inuti cellerna och har hög antigenvariation.
Om testresultaten är positiva, så finns spår av viruset i biomaterialet, då nätverket har en infektion i kroppen.
En negativ PCR-analys för hepatit C innebär att det inte finns några spår av infektion i biomaterialet.
Immunologisk studie
Med denna metod kan du identifiera antikroppar mot alla typer av hepatitvirus, liksom antikroppar mot kroppens leverceller, vars utseende bidrar till utvecklingen av autoimmun hepatit.
Resultaten som erhållits under studien är relevanta i 3 månader, då ska du donera blod till hepatit C.
Det är också möjligt att utföra en expresstudie med speciella testremsor. Denna analys gör det möjligt att bestämma antikroppar mot virus C i kompositionen av blod och saliv. Denna procedur kan utföras oberoende, hemma.
Leverbiopsi
För att utföra denna analys tas ett element av leverparenchymen och en histologisk undersökning av det erhållna biomaterialet utförs. Detta gör att du kan bedöma kroppens tillstånd: att identifiera inflammatorisk, nekrotisk foci, stadium av fibros och så vidare.
Idag används test som ersätter den histologiska analysen av hepatisk parenkym.
För att utvärdera scenen av leverskador och intensiteten i inflammationsprocessen används specifika venösa blodbiomarkörer. Med Fibrotest kan du uppskatta graden av tillväxt av fibrös vävnad.
När du utför Actitest kan du få information om intensiteten hos patologiska processer i leverparenchymen. Användning av Steatototesta kan diagnostisera fettvävnad i levern och bedöma omfattningen av denna process. Fibromax består av alla ovanstående tester och kan innehålla några andra studier.
Förberedelse för studien
Vilka tester tas för hepatit C och hur vi har hittat denna eller den typen av forskning. Det är lika viktigt att veta hur man förbereder sig för analysen.
För att uppnå tillförlitliga resultat rekommenderas att följa följande krav:
- Hepatit C-test måste tas på morgonen, på en tom mage. Förra gången mat ska förbrukas minst 8 timmar före studien.
- Biomaterialet kan samlas på dagtid eller på kvällen. I detta fall är det viktigt att minst 5-6 timmar passerar mellan den sista måltiden och analysen.
- innan du donerar blod till hepatit C, kasseras te, kaffe, juice eller andra drycker, bara vatten är tillåtet.
- 48 timmar före studien är det nödvändigt att utesluta användningen av feta, stekt mat och alkoholhaltiga drycker.
- I minst en timme innan analysen måste du avstå från att röka.
- analys ska inte utföras omedelbart efter ultraljud, instrument, röntgenundersökning, massage eller fysioterapi.
- en dag före genomförandet av studien är det nödvändigt att utesluta användning av droger och intensiv fysisk aktivitet. Emosionell stress är också kontraindicerad.
- Det rekommenderas att spendera 15 minuter innan du utför studien i lugnt tillstånd.
Genomför blodförfarandet
Var kan man bli testad för hepatit C? Biomaterialet tas för vidare utredning i laboratoriet hos en medicinsk institution eller hos patientens hem.
Blod från en ven tas enligt följande:
- Med hjälp av en speciell turinett som sitter runt patientens underarm, stoppas det venösa blodflödet. Tack vare sådana manipuleringar blir venerna fyllda med blod och kommer att bli mer synliga vilket väsentligt underlättar införandet av nålen.
- Det område av huden där nålen ska sättas in behandlas försiktigt med alkohol eller alkoholhaltig vätska.
- En nål försätts försiktigt i en ven, sedan är ett provrör fäst vid det, speciellt konstruerat för att samla blod.
- Omedelbart efter att nålen är införd i venen avlägsnas klämhöljet från patientens arm.
- efter att blodvolymen som är nödvändig för analysen samlas, avlägsnas nålen försiktigt från venen.
- En steril bomullspinne eller gasväska fuktad med alkohol måste appliceras på injektionsstället.
- För att förhindra förekomsten av ett hematom, bör tampongen pressas med en viss ansträngning mot nålinläggningsområdet, böja armen vid armbågen och hålla den i denna position i flera minuter. Sådana åtgärder kommer också att bidra till att stoppa blodet snabbare.
Under förutsättning att tekniken för intern administrering är bra, är detta förfarande absolut säkert och orsakar inte smärtsamma förnimmelser.
I sällsynta fall kan blodåren svälla efter bloduppsamlingen. Detta fenomen kallas "flebit". En komprimering (inte het) hjälper till att lösa problemet, det bör appliceras på svullna områden i huden flera gånger om dagen.
Vissa problem kan också uppstå om det finns en blödningsstörning. Ta aspirin, warfarin och andra blodförtunnare kan orsaka blödning. Det är därför som innan man utför analysen är det nödvändigt att vägra att ta mediciner. Om behandlingen inte kan avbrytas bör du informera specialisten.
Datum och priser
Hur mycket testas det för hepatit C? Resultatet av ett blodprov för hepatit kan vara klart om några timmar, och om några dagar (vanligtvis inte mer än 8 dagar). Varaktigheten av beredningen av resultaten beror på typen av virus och den valda analysmetoden. Snabbare är studien utförd av PCR-metoden. Resultaten i detta fall kommer att vara klara på bara några timmar.
Hur mycket kostar ett hepatit C-test? Beroende på kliniken och komplexiteten i studien kan priset för förfarandet variera från 400 till 11 000 rubel.
Du bör vara medveten om att det kan ta flera veckor att bilda en tillräcklig mängd antikroppar mot HVC. Därför kan resultatet av en studie på ett tidigt stadium i patologins utveckling vara falsk-negativ.
Dessutom är det möjligt att få otillförlitliga data med analys av dålig kvalitet och överträdelse av transportförhållandena för det erhållna biomaterialet (prover måste levereras till laboratoriet högst 2 timmar efter blodprovtagning).
Om resultatet av studien är positiv bör du omedelbart kontakta en smittsam sjukdomsläkare. Specialisten kommer att göra en ytterligare undersökning och förorda lämplig behandling.
Kärnan i analysen av PCR för hepatit B och dess resultat
Viral hepatit B behandlas framgångsrikt om den detekteras i tid och antalet antikroppar och antigener i patientens blod bestäms korrekt. Med hjälp av en enzymimmunanalys för hepatit är det möjligt att upptäcka närvaron av virusmarkörer, men de kan inte bestämma det exakta stadiet av processen.
För kvantitativ utvärdering användes PCR-diagnostik. Med testet är det möjligt att räkna antalet markörer, förutse sjukdomsförloppet och sannolikheten för botemedel med hjälp av antivirala läkemedel.
Den största fördelen med studien är förmågan att upptäcka även minimala koncentrationer av viruset, för att identifiera patogenen vid artsteget.
Diagnos av hepatit B
Hepatit B-virus är mycket smittsamt och motståndskraftigt mot yttre påverkan. Den förblir aktiv i blodet hos en patient i flera veckor. Därför är varje person utsatt för infektion, även om profylax observeras.
För att diagnostisera sjukdomen förskriva följande studier:
Kärnan i PCR-metoden
Amerikanska kemisten K.Mullis fick Nobelpriset, och hans diagnostiska metod används fortfarande.
Förfader till PCR-metoden (polymeraskedjereaktion) anses vara en forskare från Norge H. Kleppe. Han började först utföra DNA-förstärkningen (återhämtning) genom att använda en kort DNA-kedja, det vill säga en syntetisk primer (ett slags kopia).
Men forskaren misslyckades med att förverkliga sin idé. Liknande studier gjordes av den amerikanska kemisten K.Mullis, som år 1993 tilldelades Nobelpriset för sin uppfinning. Sedan dess har PCR använts för att upprätta faderskap, diagnostisera genetiska sjukdomar och upptäcka virus.
Kärnan i reaktionen är att med hjälp av enzymer kopieras en viss bit DNA. Du kan bara kopiera området som motsvarar de angivna parametrarna och om det finns i det presenterade provet. Följande komponenter används för att starta reaktionen:
- Matris DNA med en webbplats som ska kopieras.
- Primers liknar struktur i DNA.
- Polymeras, det vill säga enzymet som utlöser reaktionen. Det ska vara termostabil, det vill säga att motstå extremiteter i temperaturen.
- Lösning med vissa parametrar, vilket säkerställer reaktionens genomgång.
Reaktionen utförs i flera steg:
För detektion av hepatit B används två typer av reaktioner: kvantitativa och kvalitativa.
Kvantitativ PCR
Den kvantitativa metoden bestämmer mängden av HBV genomet
Kvantitativ PCR innefattar samtidig skapande av kopior av DNA-fragment och bestämning av antalet molekyler. Mätningen utförs efter varje steg, det vill säga i realtid. Detta uppnås genom att använda fluorescerande sonder, vilka ingår i en kedja av molekyler och glöd under en viss period av studien.
Denna metod används för att detektera DNA-fragment som är markörer av hepatitviruset. Med hjälp av den kvantitativa metoden är det möjligt att exakt isolera genotypen av viruset. Med andra ord beräknas antalet kopior av HBV-genomet per patientcellnummer.
Kvantitativ analys ger svar på följande frågor:
- Med vilken intensitet utvecklar sjukdomen.
- Hur effektiv är behandlingen.
- Har läkemedelsresistens utvecklats?
Dessutom är kvantitativ mätning nödvändig för diagnos av det kroniska infektionsstadiet. Om mängden DNA ligger under 100 st / ml vid normal transaminasnivå, är personen en bärare av viruset.
I den akuta fasen är mängden antikroppar mycket högre. I antiviral terapi indikerar en ökning av antalet antikroppar utvecklingen av läkemedelsresistens, detta är en signal för att justera behandlingen.
Högkvalitativ PCR
Högkvalitativ PCR ger mindre information, men kan eliminera infektion.
PCR av hög kvalitet kan endast fastställa förekomsten av patogen i blodet. Om de är frånvarande är patienten inte infekterad, om patogen kommer in i blodet, blir resultatet positivt.
Men med hjälp av kvalitativ reaktion är det omöjligt att klargöra genomet av viruset, sjukdomsstadiet. Därför utförde diagnosen HBV både kvantitativ och kvalitativ mätning.
Förbereder sig för undersökningen
Venös blod krävs för PCR-analysen. Detta måste ske på morgonen på en tom mage.
Patienten ska korrekt förbereda sig för studien:
- I 10 timmar att vägra mat kan du bara dricka rent vatten.
- På kvällen för att sluta ta alkohol, i 4 timmar att inte röka.
- Innan undersökningen bör undvikas fysisk och känslomässig stress.
- Sluta använda medicinen i 2 dagar, om det inte är möjligt, är det nödvändigt att meddela laboratorie tekniker. Vissa läkemedel påverkar slutresultatet.
Tolkning av data
I en kvantitativ reaktion utvärderas de erhållna indikatorerna beroende på antalet DNA-kopior.
Det är lätt att tolka kvalitetsmätningsdata. Han ger antingen ett positivt eller negativt svar.
I en kvantitativ reaktion är det möjligt att utvärdera de erhållna indikatorerna beroende på antalet DNA-kopior. Måttenhet är kopior / ml.
Data avkodas enligt följande:
- Om mängden HBV-DNA är mindre än 90, är infektionen frånvarande. Patienten utvecklade immunitet efter immunisering, eller han var botad av sjukdomen.
- När antalet kopior 2x100 pratar om virusets bärare.
- Antalet 2x106 indikerar ett kroniskt stadium av sjukdomen.
- Med DNA mer än 2x109 har patienten ett akut stadium av hepatit.
Felaktiga resultat
Fördelarna med den diagnostiska metoden med användning av polymerasreaktioner är som följer:
- Direkt detektering av patogener. I motsats härtill tillhandahåller ELISA information om närvaron av antikroppar mot viruset.
- Specificitet. Det vill säga det är DNA-regionen som är närvarande i biomaterialprovet som kopieras.
- Överkänslighet. Metoden kan även detektera enskilda cellfragment.
- Diagnos av sjukdomar i akuta och latenta skeden. Det är, det är möjligt att diagnostisera sjukdomen vid scenen av prekliniska manifestationer.
Metoden har brister som leder till falska resultat. Den viktigaste nackdelen är sannolikheten för kontaminering av materialet. Den främsta källan till förorening är dåligt bearbetade rör, laboratoriehänder, reagenser.
En del av DNA från en tidigare reaktion kan komma in i blodet. Därför påläggs laboratorierna ökade hygienkrav: separata rum, plaströr, ultraviolett behandling av laboratorier etc.
Falska negativa resultat kan bero på minskad känslighet av reaktionen. Detta händer i följande situationer:
- patienten tar mediciner, till exempel antikoagulantia;
- personen drabbades av fysisk stress före analysen (spelar sport, hårt arbete);
- infektion har inträffat nyligen.
Om patienten har en hög sannolikhet för infektion, och resultatet av studien är negativt, behöver han ses över.
Se även:
slutsats
Polymeraskedjereaktionsmetoden är den viktigaste och mest informativa för diagnosen av HBV. Det gör det inte bara möjligt att fastställa infektionens bärarstatus, men också för att klargöra sjukdomsfasen, för att utvärdera resultaten av behandlingen.
För en mer noggrann diagnos används en kvalitativ och kvantitativ mätning. Nackdelarna med metoden innefattar sannolikheten för kontaminering, reducerad känslighet och ett ganska högt pris.
För att resultaten ska vara mest tillförlitliga bör man ordentligt förbereda sig för studien och genomföra den i kliniken med lämplig licens och gott rykte.
Genomföra en PCR-analys för hepatit C och avkoda resultaten
Hepatit C PCR-analys är en studie vars huvudsakliga syfte är att identifiera orsaksmedlets genetiska material. Analysen avslöjar orsakssambandet hos sjukdomen genom användning av polymeraskedjereaktionen. Denna diagnos har en hög grad av noggrannhet, specificitet för att detektera frånvaro eller närvaro av en virusinfektion.
Kärnan i diagnosen
För att utföra en PCR-analys för bestämning av hepatit C-viruset från en patient tas venöst blod, vilket potentiellt innehåller RNA (ribonukleinsyra) HCV av det önskade viruset.
PCR-testet för hepatit C innebär ett förfarande för tillsättning till patientens blodpartiklar:
- primers (kort artificiellt syntetiserade regioner av den nödvändiga genen);
- speciellt enzym (RNA-polymeras).
Efter provtagning skickas det biologiska materialet för forskning till laboratoriet. En del blod behövs för direkt PCR-analys, den andra skickas för testning med ELISA. Enzymet kan på kort tid öka antalet genetiska material av patogenens virus. I en speciell apparat utförs flera cykler av värme- och kylprocesser. Vid slutsteget jämförs det erhållna materialet med virusens gener och en slutsats görs om närvaron eller frånvaron av patologi i patientens kropp.
Kärnan och genomförandet av PCR-analys i laboratoriet. Filmerad av SiberianMedicalLaboratory.
Typer av forskning
Det finns 3 typer av diagnostik som gör det möjligt att bestämma förekomsten av hepatit C-virus i människokroppen:
- genotypning;
- kvalitet;
- kvantitativ.
Kvalitativ metod
Diagnos av hepatit C med kvalitativ metod är tillämplig för patienter i vilka antikroppar mot viruset detekteras i blodprovet. I fallet med närvaron av den akuta fasen av HCV RNA kan sådana diagnostiska åtgärder bestämma förekomsten av sjukdomen inom 1-2 veckor efter infektion. Under denna period kan antikroppar mot hepatit C ännu inte utvecklas.
Kvantitativ metod
En kvantitativ diagnostisk metod används för att bestämma virusets koncentration i blodprover. Ett sådant test för viremia (grad av koncentration) gör det möjligt att exakt bestämma antalet enheter av viralt RNA. Slutresultatet uttrycks i motsvarande volym. Om vi talar om kvantitativ analys mäts indikatorerna i 1 ml (1 cub.cm).
Den virala belastningsparametern betyder nivån av infektiöshet hos sjukdomen, det vill säga reflekterar graden av "infektiöshet" hos patienten. I praktiken innebär detta att ju högre koncentrationen av viruset i blodet desto större är risken för att patienten smittar andra med hepatit C. En kvantitativ forskningsmetod låter dig också fastställa kvaliteten och effektiviteten av behandlingen.
genotypning
Genotyping avslöjar mutationer av sjukdoms orsakssamband. Innan en behandlingsplan förskrivs bestäms virusgenotypen: kvaliteten och varaktigheten av behandlingen beror på den. Till exempel, vid behandling av I-typ-sjukdom är effektiviteten 60%, i fallet II, III-typ - ca 80%.
Fördelar med hepatit PCR-analys
Bland de viktigaste fördelarna med förfarandet är:
- Möjligheten till tidig diagnos. PCR-analys kan upptäcka närvaron av ett virus i de tidiga infektionsstadierna.
- Låg felresultat. Den studerade biologiska resursen låter dig diagnostisera en sektion av genetiskt material som är karakteristiskt för endast en typ av virusinfektion. Denna omständighet möjliggör förhindrande av felaktiga diagnostiska resultat.
- Hög grad av känslighet. PCR-analysen kan detektera RNA i viruset i små mängder, vilket också gör det möjligt att spåra latenta infektioner i tid.
Indikationer för
Test för PCR för hepatit C är nödvändigt, om tillgängligt:
- ha kontakt med sjuka människor, vilket kan leda till infektion
- symtom på levercirros (utvidgning av mjälten, okarakteristiska förändringar i leverans storlek, upptäckt av venös plexus på buken under huden);
- positiva resultat av ELISA;
- ökad aktivitet av AST och ALT (manifesterad i den biokemiska analysen av blod);
- Behovet av att kontrollera antiviral terapi
- Det första behandlingsstadiet för behovet av att etablera en virusbelastning.
- genomföra det slutliga behandlingsstadiet för att utesluta eventuella återkommande
- patienten har hepatit B för att utesluta utvecklingen av en blandad leverskade.
Hur man förbereder sig för bloddonation för PCR-forskning
Förberedelser för PCR-analys inkluderar följande rekommendationer:
- blod tas på morgonen;
- analysen utförs på tom mage, så det är lämpligt att ta en paus mellan det senaste matintaget på 8-10 timmar;
- några dagar innan diagnosen bör uteslutas fet, kryddig och stekt mat, alkoholhaltiga drycker och rökning,
- en dag före analysen bör man avstå från tung fysisk ansträngning, utesluta klasser i gymmet eller poolen.
Analysresultat: normer och avvikelser
Analysen i sig är inte långsiktig, och den högkvalificerade specialistspecialisten för hepatolog eller infektionssjukdom dekrypterar resultaten av PCR för hepatit C. Baserat på analysens resultat diagnostiseras patienten.
För att korrekt avkoda resultaten från undersökningen beaktas följande indikatorer:
- biokemisk analys av blod;
- ultraljudsdata;
- biopsi resultat.
Tolkning av kvantitativ analys
När man erhåller resultaten av PCR-kvantitativ analys beaktas följande indikatorer:
PCR diagnostik för hepatit C
Hepatit C är en inflammation i levercellerna som uppstår som en följd av infektion med HCV-viruset (hepatit C) genom kontakt med ett infekterat blods blod. Den genetiska koden för HCV-flaviviruset bäres av en RNA (ribonukleinsyra) -molekyl som ingår i virusets struktur. Detta livshotande fenomen utmärks av sekretess i patologins inledande skede. Tidsintervallet mellan infektion och symptompåverkan (immunsvarets respons) kan vara från en månad till sex månader. I regel tar sjukdomen en kronisk form och är svår att bota.
Modern medicin låter dig diagnostisera patologi med mindre leverskador. De vanligaste och mest effektiva diagnostiska metoderna innefattar PCR-analys. Tänk på i den här artikeln vad det är och vilka slags det finns.
Vad är studien
PCR-analys för hepatit C är en laboratorieundersökning som upptäcker flavirus, det genetiska materialet av ribonukleensyra (RNA). Det bestämmer antalet RNA-molekyler i blodet, kvaliteten på det biologiska materialet, den genetiska typen av HCV-flavirus.
PCR-metoden för hepatit C gör det möjligt att upptäcka minsta mängd flavirus före bildandet av antikroppar, som regel, strax efter infektion.
Studien refereras ofta till som RNA-analys, eftersom den detekterar ribonukleinsyrapartiklar med en storlek av 30-60 nm som finns i flavaviruset.
Studien utförs enligt följande: i en tom mage, ger patienten blod från en ven, som sedan testas med olika metoder:
- Realtids-PCR utförs på sluten automatiserat sätt och har en lägre gräns för detektering av RNA-virus, lika med 15 IE / ml;
- COBAS AMPLICOR med en känslighet av 50-100 IE / ml.
Ju högre tröskelvärdet för den diagnostiska tekniken är, desto större är risken att hitta den lägsta virushalten i det biologiska materialet som undersöks.
Vilka typer av analys som används
En analys som framgångsrikt använts i flera årtionden kallas PCR-hepatit, och det kan detekteras ganska enkelt och snabbt. I medicin finns det två metoder för reaktionen, som är fundamentalt olika från varandra:
- kvalitativ metod avslöjar närvaron i det biologiska materialet av den genetiska källan till ett specifikt virus;
- kvantitativ analys mäter antalet genetiska ämnen, vilket tillåter att bestämma patologins stadium eller utvärdera effektiviteten av den terapeutiska kursen;
- genotyping bestämmer vilken typ av virus som finns i kroppen.
I allmänhet bidrar ett blodprov till att identifiera typen av viremia och patogenens genetiska typ. I regel utförs forskning 1 gång beroende på graden av känslighet hos diagnosystemet. Vid behov utförs retesting med hjälp av ett ultrasensitivt reagens.
Högkvalitativ PCR
Vad är högkvalitativt PCR-RNA för hepatit C? Essensen av reaktionen ligger i närvaro av hepatit-RNA-sekvensen, och reaktionen är möjlig endast i närvaro av virusproteiner med liknande etymologi i ELISA. Vid jämförelseprocessen detekteras belastningen och eventuell skada på levern.
En särskiljande egenskap hos denna metod är förmågan att detektera även närvaron av en separat gen.
Det bör noteras att patienten efter mottagande av resultaten från PCR- och ELISA-testen kräver lämplig behandling, oberoende av vad det slutliga immunoassayresultatet var. Positiv indikerar infektion och PCR-negativ indikerar ett minskat antal viruspartiklar i förhållande till känslighetsnivån.
Det finns flera villkor som påverkar produktionen av en negativ PCR och ELISA:
- brist på lämpliga materialinsamlingsförhållanden
- Den resulterande analysen innehåller förorening;
- i händelse av en tidig injektion av heparin till patienten.
Patienten behöver inte följa vissa regler för blodprovtagning för PCR-analys, i det här fallet beror kvaliteten på denna analys på den medicinska proffs som utför förfarandet. Förmågan att fastställa förekomsten av sjukdomen (speciellt i akut form) framträder inom några veckor efter infektion.
Kvantitativ analys
Ett kvantitativt test rekommenderas för detektering av virusbelastning omedelbart före bildandet av ytterligare terapi och kroppens reaktion. Proceduren för blodprovtagning utförs på ett liknande sätt som med högkvalitativ PCR och ELISA är det enda tillståndet frånvaron av möjligheten att röka patienten före förfarandet.
Med avseende på de egenskaper som erhållits vid dataundersökning kännetecknas den ökade belastningen av indikatorer från 800000 IE / ml, låg - 400000 IE / ml. Förekomsten av ett virus i patientens kropp indikeras av PCR för hepatit är inte ett negativt kvalitativt test.
Denna typ av forskning gör det möjligt att bestämma hur farlig patienten är för människorna kring honom. Att identifiera en hög nivå indikerar exempelvis en ökad smittsamhet hos patienten. Dessutom hjälper resultaten av analysen till att formulera den mer effektiva behandlingen och bestämma hur mycket den befintliga terapin anses effektiv.
Testets snabba negativa respons indikerar framgången för den valda tekniken, och den långsamma indikerar behovet av justeringar och användningen av mångfacetterad behandling.
Processen att ta analysproceduren beror på den specifika dagen för sjukdomsförloppet. Den första bestämningen utförs den första dagen efter att patienten är inlagd på sjukhuset, så upprepas proceduren vid 4, 12 och 24 veckor efter att medicinerna tagits.
En kvantitativ analys visar således vilken behandling som är effektivast, varaktigheten av den tillgängliga behandlingen och patientens fara i förhållande till andra människor.
genotypning
I studien av materialanalys är det viktigt att bestämma noggrannheten hos virusgenotypen som äger rum. För närvarande finns det 11 sorter av hepatit C-viruset, som i sin tur innehåller vissa underarter.
Alla dessa arter svarar annorlunda mot olika behandlingar, med individuella sorter som är absolut resistenta mot många droger.
Genotypen gör det möjligt att bestämma och visa leverns tillstånd. Det är inte ovanligt att resultaten "inte skrivs" i resultaten, vilket innebär att viruset i patientens blod inte detekteras av detta testsystem. Detta kan detekteras om en viss genotyp inte matchar den här zonen. I en sådan situation tas analysen upprepade gånger, och ett mer känsligt system används för att studera materialet.
Ultra känslig metod
Den ultrasensiva metoden är nödvändig i vissa fall då diagnosen hepatit inte kan utföras med andra metoder och när man tar en analys bestäms av den behandlande läkaren:
- om du misstänker förekomsten av hepatit C-virus hos patienter med en dold sjukdomssyta;
- förekomsten av antikroppar mot hepatit C-viruset, inte bekräftat genom PCR-diagnostik;
- för att bestämma kvaliteten på effektiviteten hos den valda behandlingsmetoden och bekräfta eliminering av sjukdomen.
Känsligheten för denna metod är mycket högre än de som vanligtvis används, men denna metod utesluter inte att få falska resultat, både positiva och negativa. I en sådan situation är det viktigt att kontrollera procedurens kvalitet och möjligheten att förorena materialet självt.
Förklaring av PCR-analys
Avkodningen av analysen utförs på basis av de presenterade materialen, medan laboratorieforskningsresultaten inkluderar vissa data som beskrivits ovan.
Transkriptet kan innefatta en positiv PCR-polymeraskedjereaktion och en negativ ELISA i analysen, vilket innebär att patienten inte har några tecken på hepatit C i blodet men tidigare har han överfört den akuta formen av sjukdomen. Som regel, vid diagnos, tillgriper specialister användningen av PCR-testindikatorer.
Sammanfattningsvis alla ovanstående kan man dra slutsatsen att under analysen är det viktigt att följa alla regler och rekommendationer så att de erhållna resultaten är så korrekta som möjligt och på grundval av de erhållna uppgifterna är det möjligt att bestämma effektiviteten av den använda terapin och den ytterligare chansen på full återhämtning.
PCR-analys för hepatit C
För diagnosen "kronisk viral hepatit C (CVHS)" krävs en omfattande undersökning av personen, som inkluderar kliniska, laboratorie- och instrumentstudier. Viktigt ur diagnossynpunkt för den korrekta diagnosen är PCR-metoden - polymeras kedjereaktion.
Vad visar denna analys och varför behövs det?
Denna laboratoriemetod detekterar RNA hos hepatit C-viruset i humant blod. Tillsammans med den enzymbundna immunosorbentanalysen (ELISA) för antikroppar mot viruset används PCR för att diagnostisera CVHC och dess patogengenotyp. Denna forskning är en av de nyaste metoderna för laboratoriediagnostik. Tillförlitligheten vid CVHS överstiger 97%, vilket anses vara en mycket bra indikator för forskning.
Det finns tre PCR blodprov för CVHS: kvalitativ, kvantitativ och virusgenotyping. Den första studien (kvalitativ analys) av viruset detekterar det i blodet och används därför endast för diagnos.
Den andra (kvantitativa) studien bestämmer graden av viral belastning på kroppen, därför används för att övervaka effektiviteten av behandlingen.
Den tredje PCR (genotypning) klargör diagnosen, vilket fastställer genotypen av viruset, vilket är mycket viktigt för utnämningen av korrekt antiviral behandling.
Kärnan i polymeras kedjereaktionstekniken är användningen av enzymer som multiplicerar patogenens genetiska material i biomaterialet. Under processen för sådan replikation upphettas röret med blod flera gånger och kyles till den temperatur som krävs för att accelerera den enzymatiska reaktionen. Som ett resultat av dessa manipuleringar ökar mängden av virusgenomet många gånger, så att det kan detekteras även med en minimal mängd.
PCR-diagnostik har många fördelar jämfört med andra laboratorietester:
- hög känslighet - 97-98%;
- garanterad analytisk specificitet (avslöjar exakt den patogen som du vill hitta och inte dess relaterade stam);
- Hastighet av ledning (det tar inte mer än 2 dagar att få en slutsats).
Tre typer av PCR-analyser
Högkvalitativ PCR-analys tilldelas alla patienter i vilka ELISA-analysen upptäckte antikroppar mot HVGS-viruset. Efter utförande av högkvalitativ PCR kan två svaralternativ erhållas: "RNA detekteras" eller "RNA detekteras inte." För att detektera minsta mängd virus i blodet krävs testsystem med en känslighet av minst 50 IE / ml. Om koncentrationen av viruset i patientens blod är mindre än diagnostiken kan avgöra kan resultatet av studien vara falskt negativt. För att undvika ett sådant diagnostiskt fel ska laboratorier som utför PCR-diagnostik förses med mycket känsliga testsystem. I laboratoriet "Invitro" används exempelvis tester med en känslighet av 15 IE / ml. Laboratoriearbetare är skyldiga att lämna information om testens känslighet för patienter och läkare vid deras första förfrågan.
Kvantitativ analys av PCR bestämmer graden av viremi, det vill säga koncentrationen av patogenen i blodet, viral belastning. Resultatet av denna studie, i motsats till högkvalitativ PCR, uttrycks i antal, till exempel 2 × 10 * 6 IE / ml, vilket innebär 2 miljoner internationella enheter i 1 ml blod. Vissa laboratorier använder en annan indikator - antalet kopior / ml. Dessa två indikatorer är lätta att konvertera: 1 internationell enhet motsvarar 4 kopior av RNA. Således betyder 2 × 10 * 6 IE / ml att 8 × 10 * 6 kopior av viralt RNA i 1 ml, dvs. 8 miljoner exemplar i 1 ml blod.
Genotyping är definitionen av ett av sex genotyper av ett virus. Den kliniska bilden, utvecklingsgraden av leverkomplikationer och prognosen för patientens framtida liv beror på orsaksmedlets genotyp. Genotypen av viruset är mycket viktigt redan vid diagnossteget, eftersom kombinationen av läkemedel och varaktigheten av den terapeutiska kursen som ska tilldelas patienten beror på dess korrekta bestämning.
Men även denna till synes "perfekta" laboratorieforskning har dess nackdelar:
- Studien replikerar det genetiska materialet hos alla patogener, även icke-levande, vilket kan snedvrida resultatet. För att övervaka effektiviteten med hjälp av PCR utförs därför reanalys inte tidigare än 2 månader efter föregående, så att de döda virusen kan "lämna" patientens organism.
- En del av virusgenomet, som bestäms med hjälp av testsystem, kan teoretiskt vara närvarande i andra virus eller mikroorganismer, så det finns en möjlighet till falskt positivt svar.
- virus mutera snabbt. Ibland är hastigheten och omfattningen av virusmutation så hög att testsystemet slutar fånga sitt genom. Som ett resultat är ett falskt negativt resultat möjligt.
För att jämföra dessa brister utför tillverkare av laboratorietestsystem för PCR-diagnostik hela tiden sina test, inklusive korsreaktioner och känslighet för en viss genotyp av viruset.
Hur man tar ett PCR-test för hepatit C?
För att en PCR-undersökning ska kunna vara tillförlitlig är det nödvändigt att strikt följa förberedelsebestämmelserna för sitt beteende:
- Studien utförs på en tom mage (glukos, fetter, mineraler som kommer in i blodet från mat, kan påverka hastigheten och kvaliteten på enzymreaktionen).
- Mellanrummet mellan sista måltiden och blodprovtagning för analys bör vara minst 8 timmar;
- På dagen före studien är det förbjudet att ta alkohol och konsumera feta livsmedel, vars elimineringsperiod är långvarig.
- En dag innan man går till laboratoriet bör man undvika stark fysisk och känslomässig stress.
- tills blodprovstiden inte rekommenderas att röka.
För att undvika utseendet av falska slutsatser måste den påstådda patienten komma till laboratoriet lite tidigare än blodet kommer att tas. Det tar 15-20 minuter för en person att få andan, lugna sig ner. Adrenalin, som är närvarande i blodet efter en snabb promenad, kan påverka resultatet av undersökningen.
Om patienten som avses för analys tar några mediciner, ska han informera läkaren om detta. Det är möjligt att vissa av dem måste nekas under en tid (om möjligt).
Resultatet av analysen av PCR för hepatit C
Avkodning av resultaten involverade i laboratorieläkaren i laboratoriet som utförde analysen. Avkodning är bestämningen av avvikelsen för resultatet erhållet från normen. Indikatorhastigheten fastställs direkt av tillverkaren av testsystemet, som används av laboratoriet för diagnostik. Därför är det inte förvånande att i vissa laboratorier bestäms virusbelastningen i IE / ml och i andra i kopior / ml.
Efter att ha fått slutsatsen är det nödvändigt att kunna tolka det korrekt. Behandlingen av resultaten av studien ska utföras av patientens behandlande läkare med hepatit C. Endast efter en objektiv, instrumentell och laboratorieundersökning av patienten kan läkaren få en tillräcklig mängd data för korrekt tolkning av de erhållna PCR-resultaten.
Utvärdering av kvalitativ analys leder som regel inte till svårigheter, även hos patienter. Resultatet där kan bara vara ett: "detekterat" eller "ej detekterat". I det här fallet är den andra av dem normen.
Indikatorer för kvantitativ analys är svårare att tolka. Det visar graden av virusbelastning på patienten. Även bland hepatologer finns det ingen överenskommelse om hur man behandlar detekterade viremierna. De flesta läkare är benägna att tro att en hög belastning på mer än 8 × 10 * 5 IE / ml bör övervägas. En belastning på mer än 1 × 10 * 7 IE / ml anses vara mycket hög, medan en låg belastning är mindre än 4 × 10 * 5 IE / ml.
Graden av virusbelastning indikerar virulens (aggressivitet) av viruset: Ju större dess mängd i blodet desto snabbare komplikationerna i levern kan utvecklas. En hög koncentration av viruset i en gravid kvinnas blod ökar sannolikheten för dess penetration genom hemato-placental barriären till fostret. Viremia påverkar också effektiviteten av behandlingen: med lågt antal är effektiviteten av behandlingen högre än hos de höga.
För att vara säker på noggrannheten i analysen av PCR för hepatit C är det nödvändigt att föredra endast de laboratorier som är väl beprövade. Prissättningspolicy i detta fall borde inte spela en huvudroll.