ELISA för viral hepatit

9 mars 2017, 16:25 Expertartiklar: Nova Vladislavovna Izvochkova 0 3,608

För att upptäcka viral hepatit i kroppen använder läkemedel i stor utsträckning en enzymimmunanalys baserad på detektering av koncentration och typ av antigener med användning av antikroppar och enzymer. Det genomförs i steg, genom laboratorieforskning, med hög noggrannhet av indikationer. Beroende på mängd och klass av antikroppar, förändras färgen och koncentrationen av enzymet som använder ELISA och därmed läkaren diagnosen sjukdomen.

Vad är ELISA?

Förekomsten av viral hepatit i patientens kropp bestäms med hjälp av en serologisk metod för blodanalys för närvaron av HCV-virus och markörer (kroppar och antikroppar) som indikerar det. Enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA) undersöker olika virus, föreningar med låg molekylvikt, makromolekyler, deras kvalitativa och kvantitativa indikatorer, med användning av manifestationen av reaktionen på deras antigener. För att göra detta, använd enzymet som en etikett för signalregistrering. Det används alltmer i medicin, för ELISA finner tydligt väldefinierade antigener, utan att förvirra dem med andra, har en hög känslighet för förekomst av invasion av viral hepatit.

Nackdelen med en sådan diagnos är oförmågan att identifiera orsaken till sjukdomen, eftersom metoden endast indikerar reaktionen av kroppens immunförsvar. Resultaten av analysen påverkas av tidigare utförd vaccination. I 8 timmar före analysen rekommenderas att avstå från att äta, nikotin, alkohol. Grunden för ELISA-testet är kroppens enzymatiska och immunsvar mot viruset. Biologiska molekyler binder till cellen och dess element, mikroorganismer, upptäcker viruset och arbetar sedan med enzymer som låter dig uttrycka immunsvaret i en synlig och mätbar parameter.

Indikationer för analys

Viral hepatit i kroppen kan orsaka cancer och levercirros. Betydelsen av tidig diagnos är obestridlig. Den primära metoden för diagnos är ELISA-testet, som med hög noggrannhet bestämmer närvaron av HCV-viruset (IgM och IgG) och aktiviteten hos dess spårämnen. Obligatoriska tester för viral hepatitpass:

  1. Människor med riskgrupper (narkomaner, personer med aids, anställda hos medicinsk och brottsbekämpande institutioner).
  2. Människor med akut eller kronisk hepatit.
  3. Gravid och planerar graviditetskvinnor.

ELISA erkänner sjukdomen vid något tillfälle. Resultatet av analysen är i genomsnitt klart i 2 dagar.

Kriterier som bestämmer betydelsen av analys

ELISA-testet bestämmer närvaron av antikroppar av klass IgG, IgM, IgA. Vid diagnos av viral hepatit uppmärksammar läkaren inte deras typ, eftersom närvaron av någon sådan manifestation av HCV-viruset redan indikerar ett akut eller kroniskt stadium av sjukdomen. I de tidiga stadierna av sjukdomen stiger nivån av IgM (5 dagar efter infektion); På den 15: e och 20: e dagen uppträder IgG-antikroppar och kan förbli i humant blod under en lång tid även efter botemedel. IgA - visas efter 10-14 dagar, minskar efter behandling.

Om IgG och IgA detekteras efter användning av droger och deras nivå förblir i samma takt - bäraren har en kronisk form av hepatit. Ett viktigt kriterium för testet kommer att vara en tydlig definition av den tillgängliga antikroppsklassen och deras kvantitet. Baserat på detta kan man inte bara veta om förekomsten av sjukdomen, utan också utvecklingsstadiet. Detektering av sådana element i patientens blod gör det möjligt att föreskriva korrekt och snabb behandling för att förhindra allvarligare konsekvenser.

Hur är det gjort?

Tilldela direkt och inte direkt ELISA-test. Stadier direkt:

  1. Samla in biologiskt material och placera det i speciella hål.
  2. Inom 15-30 minuter antigener är fästa vid brunnarnas yta.
  3. Läggande av antikroppar till brunnarna till antigenet som hittats. Alla lämnade i 1-5 timmar.
  4. Ta bort unattached antigener (häller brunnsinnehållet).
  5. Skölj brunnarna med en speciell lösning.
  6. Tillsätt enzymlösning i brunnarna. Lämna i 30 minuter - 1 timme.
  7. Användningen av kolorimetri (detektering av färg och koncentration av färg av brunnets innehåll, jämförelse med indikatorer som är direkt proportionella mot virusets koncentration).
Användning för diagnos av indirekt ELISA ger ett mer exakt resultat.

Den indirekta ELISA-metoden sker med användning av omärkta antikroppar mot de funna antigenerna och den efterföljande tillsatsen märktes till dem. Först tas blod från patienten och sprids genom brunnarna i 15-30 minuter. (antikroppar är fixerade med hål). Därefter introduceras omärkta antikroppar i dem i 1-5 timmar (antikroppsanslutning med antigener bildas - immunkomplexet). Därefter hälls fria mikroelement från brunnarna och tvättas med en speciell lösning. Vid nästa steg lägger laboratorietekniker märkta spårämnen till brunnarna i 15-30 minuter. (detta binder omärkt med det märkta med bildningen av det komplexa "antikropp-antikropp-antigenen"). Extra (lös) avlägsnas igen under tömning och tvättning med lösning. Nästa är enzymet som ändrar färg på 5-30 minuter. stannar i hålen och färgdata jämförs med data i tabellindikatorerna. Indirekt ELISA är mer exakt.

Vad visar en ELISA för viral hepatit?

Immunoassay gör det möjligt att upptäcka närvaron av infektion (hepatitvirus av alla slag, hiv, herpes, syfilis, cytomegalovirus, mässling, rubella, hudsvirus, Epstein-Barr-virus), är en markör för autoimmuna sjukdomar, cancerceller. Indikerar brott mot reproduktiva funktioner (förändringar i testosteron, prolactin, östradiol och progesteron), sköldkörtelfunktion, helminthantering, klamydia. Effektiv för detektering av ureaplasmos, kikhosta, Dange-virus, West Nile-virus, Borrelia. Listan över definitioner är hög, innehåller många saker.

Bekräftelse av resultat

Bestämning av HCV-virusantigen genom ELISA ger 98% noggrannhet. Det används också för att retestera biologiskt material med fuzzy tidigare indikatorer. Förekomsten av IgM-antigener är inte en indikator för akut hepatit och kräver ytterligare forskning. När ELISA-testet upprepas, sammanfaller resultaten med 90-100%. I fall av minimal skillnad, är medelvärdet tagen som en indikator. För maximal noggrannhet när det gäller läkare råder parallellt att genomföra en biokemisk analys av blod. För att testa resultaten efter enzymimmunanalysen kan du använda andra diagnostiska metoder.

Forskning om viral hepatit med metoden för ife

ELISA vid diagnos av viral hepatit. Enzymimmunanalysförmåga

Specifik laboratoriediagnos av viral hepatit baseras på användningen av immunokemiska och molekylärbiologiska forskningsmetoder. De huvudsakliga immunokemiska metoderna är radioisotop eller radioimmun (RIA) och immunoanalys (ELISA). Immunokemiska diagnostiska metoder är baserade på den specifika interaktionen av ett antigen - en antikropp med efterföljande identifiering av komplexet med hjälp av speciella etiketter. Den vanligaste enzymimmunanalysen.

De första rapporterna om användning av enzymimmunanalys. som en metod för att bestämma några ämnen publicerades 1971 samtidigt av två forskningsgrupper - V. Van Weemen, A. Schuurs och E. Engvall, P. Perlmann. Enzymimmunanalysen är baserad på följande princip: I fast fas, som huvudsakligen använder ytan av brunnarna i en polystyrentablet, fixeras antigenet av det infektiösa medlet eller antikroppen (ofta en blandning av antikroppar) till antigener som ska detekteras. Detta antigen eller antikroppar, vilka är fixerade på den fasta fasen, kallas immunosorbent.

Som ett resultat av inkuberingen av immunosorbenten och testserumet i närvaro av ett detekterbart medel är de bundna till antigen-antikroppskomplexet. Efter tvättproceduren, under vilken obundna antigener och antikroppar avlägsnas, utförs inkubation med konjugatet. Som ett konjugat för detektering av HBsAg används anti-HBs, vid detektion av antikroppar mot hepatit C-viruset - antikroppar mot humana immunglobuliner (antiviruskonjugat) märkta med pepparrotperoxidas. Som en följd av denna inkubation sker bindning till de redan existerande antigenkomplexen - antikroppen av det ytterligare införda konjugatet. Efter avlägsnande av obundet konjugat (tvätt) införs substratet i brunnarna. Vid användning av ett peroxidaskonjugat används väteperoxid som ett substrat i kombination med en indikator, som oftast används som ortofenylendiamin (OPD) eller tetrametylbensidin (TMB). Resultatet uppskattas fotometriskt.

Kvaliteten och tillförlitligheten hos de analytiska egenskaperna hos enzymimmunanalysmetoden kännetecknas av ett antal kriterier, som innefattar känslighet, specificitet, noggrannhet och reproducerbarhet.

Känslighet är den minsta mängd av ett ämne som kan detekteras genom enzymimmunanalys. I detta fall är den nedre gränsen för känsligheten av denna metod koncentrationen av testämnet i provet, vilket motsvarar det minsta positiva resultatet av bestämningen, som statistiskt signifikant skiljer sig från indikatorerna för avsiktligt negativa prover. Känsligheten hos en IFTS beror på ett antal omständigheter som är relaterade både till testsystemets design (immunosorbentens affinitet, kvaliteten på extraktions- och buffersystemen) och upplösning och noggrannhet av registreringsmetoden.

Specificitet - förmågan att identifiera exakt komponenterna för bestämning av vilken denna enzymimmunanalys är utformad. Specificiteten av ELISA bestäms i stor utsträckning genom korreaktionen av antikroppar eller antigener (det vill säga kompositionen som används som en immunosorbent) med nära besläktade föreningar, liksom sammansättningen av inkubationsmediet (matriseffekten).

Korrekthet - korrespondensen av medelvärdet av resultaten av upprepade bestämningar av samma kontrollprov med det verkliga värdet av den uppmätta parametern. Noggrannheten för bestämningen i ELISA beror på testsystemets kvalitet och kontrollprovet. För goda immunanalysprovningssystem är korrigeringsindikatorerna i intervallet 90-110%. Egenheten hos biomedicinsk forskning i ELISA är omöjligheten att fastställa det exakta värdet, och därför är medelvärdet av flera expertlaboratorier tagit som det verkliga värdet. Det statistiska kriteriet för korrekthet är det aritmetiska medelvärdet och graden av avvikelsen från det sanna värdet, uttryckt i procent.

Reproducerbarhet - Testsystemets förmåga att visa samma värden med upprepade studier av samma prov. Reproducerbarheten beror både på slumpmässiga fel (fel) under proceduren för inställning av reaktionen, och på testsystemens kvalitet och noggrannheten i metoden för att registrera resultaten. Man tror att reproducerbarheten av samma kontrollprover av samma företag i olika laboratorier inte får överstiga värdet av variationskoefficienten på 15%.

Det finns flera specifika ELISA-system för bestämning av virala hepatitmarkörer: a) direkt enzymimmunanalys; b) indirekt enzymimmunanalys c) kompetitiv inhibering c) "trap" eller "capture" -metoden.

Av molekylära biologiska metoder för diagnos av viral hepatit, polymeras kedjereaktion och hybridisering används vanligare. Dessa metoder, särskilt PCR, gör det möjligt att detektera mycket små mängder specifikt viralt DNA eller RNA och således döma replikation och i vissa fall replikationsaktivitet.

Hepatit C blodprov

Hepatit C är en av de vanligaste leversjukdomarna som uppträder vid infektion med hepatit C-viruset (HCV), som kommer in i kroppen i första hand när det kommer i kontakt med ett infekterat blods blod. Kronisk och akut hepatit C uppträder. I 70-80 procent av patienterna med akut hepatit C finns inga symtom på sjukdomen, men i vissa fall, efter en tid efter infektion, finns det manifestationer av sjukdomen som uttrycks i utmattning, buksmärta, aptitförlust, mörkare urin, kräkningar, illamående, lätta avföring, gulsot, smärta i lederna. Symtom uppträder som regel 6-7 veckor efter infektion, men varaktigheten av tecken på sjukdomen börjar variera från 2 veckor till sex månader. Om ovanstående symptom uppstår måste du konsultera en smittsam sjukdomsläkare och ha ett blodprov för hepatit C. Diagnos av hepatit, som genomförs i rätt tid, kan upptäcka sjukdomen i sina tidiga skeden och öka risken för återhämtning avsevärt.

När ett hepatit C-test är planerat

Situationer när ett hepatit C-test krävs:

  • under graviditet och familjeplanering
  • patienter med symptom på kronisk eller akut hepatit;
  • personen är i fara. Dessa är medicinska arbetare, personer i fängelse, brottsbekämpande personer, personer som använder droger, har ett stort antal sexpartner, har aids, är på hemodialys och andra.

Förberedelse för hepatit C-analys

Särskild förberedelse för analys av hepatit C är inte nödvändig. För analys tas blod från en ven i en tom mage, samtidigt som åtminstone åtta timmar ska passera efter sista måltiden.

Hepatit C ELISA analyser

Den första analysen, som vanligtvis föreskrivs för diagnos av hepatit C-ELISA-test (enzymbunden immunosorbentanalys). Hepatit C ELISA-analyser gör det möjligt att detektera närvaron av antikroppar mot hepatit C-viruset (anti-HCVAb) i blodet. Om resultatet av ELISA-testet är positivt indikerar det att det finns kontakt med kroppen med hepatit C-viruset. Men 40% av dem som har en positiv ELISA upptäcker inte viruset i blodet. Detta fenomen kallas ett falskt positivt resultat. Även med hjälp av ELISA kontrolleras blod från donatorn.

RIBA för hepatit C

RIBA-analysen för hepatit C används för att bekräfta ett positivt ELISA-resultat. Den rekombinanta immunoblottningsmetoden (RIBA) är en mer exakt studie av närvaron av antikroppar mot hepatit C-viruset. Förekomsten av hepatit C-virus i kroppen bestämmer inte heller ett positivt resultat, men bekräftar endast förekomsten av antikroppar.

Hepatit C-PCR-test

För att detektera närvaron av hepatit C-virus i blodet (HCV RNA) och för att göra en diagnos använder de oftast analysen med polymeras kedjereaktion (PCR). Denna studie gör det möjligt att med hög noggrannhet detektera närvaron i blodet till och med en liten del av viruset. PCR-analys för hepatit C kan avslöja närvaron av ett virus redan 5 dagar efter infektion, långt före förekomsten av antikroppar. När resultatet av PCR-analysen är positiv betyder det närvaron av en aktiv infektion.

Det finns sådana variationer av PCR-analysen:

  • kvantitativ PCR, som gör det möjligt att bestämma inte bara faktumet av virusets närvaro utan också virusbelastningen (mängd viruset). Denna indikator är av stor betydelse för att bestämma effektiviteten av behandlingen;
  • genotyping som etablerar genotypen av hepatit C-viruset, vilket är viktigt för att bestämma behandlingens varaktighet och taktik. Det finns mer än 10 genotyper av hepatit C-viruset, men för klinisk praxis räcker det med att definiera fem av de vanligaste typerna: 1a, 1b, 2,3a / 3b.

Kvantitativ PCR-analys utförs:

  • med ett kvalitativt positivt test för närvaron av hepatit C-virus-RNA i serum;
  • för en noggrann bedömning av effektiviteten av behandlingen;
  • för att bestämma patientens behandlingstakt.

Det finns inget direkt samband mellan svårighetsgraden av hepatit C och mängden virus i blodet. Koncentrationen av viruset påverkar sjukdomens infektivitet, det vill säga ju större mängden virus i patientens blod desto större risk för överföring av viruset, exempelvis genom sexuell kontakt eller från mor till barn. Effektiviteten av behandlingen beror också på virusets koncentration. Under behandlingen är en gynnsam faktor en låg viral belastning, och en mycket hög är ogynnsam.

Genotypsanalys görs:

  • med ett kvalitativt positivt test för närvaron av hepatit C-virus-RNA i serum;
  • för en noggrann bedömning av effektiviteten av behandlingen;
  • att bestämma patientens behandlingstakt
  • att förutsäga förkortningen av den smittsamma processen
  • för att bestämma sjukdomsprogressionen.

Detektion av genotypen av viruset är av stor betydelse för att bestämma behandlingens varaktighet, vilket är viktigt eftersom interferon har ett brett utbud av biverkningar och låg patienttolerans.

Dekodningsanalys för hepatit C

Normalt är virus-RNA, antikroppar mot dem och antigener helt frånvarande. Förekomsten av antikroppar i blodet indikerar närvaron av kronisk eller akut hepatit C eller återhämtningsperioden. Om HCV RNA är närvarande i blodet, vilket bestäms genom PCR-analys, indikerar detta närvaron av ett virus i blodet.

Med en felaktig testteknik, transport och blodavvikelser kan PCR-analys ibland visa falska positiva resultat. Analyser av ELISA och RIBA i de tidiga skeden av sjukdomen, när kroppen ännu inte har producerat tillräcklig mängd antikroppar, kan visa ett falskt negativt resultat.

Om positiva resultat erhålls vid avkodning av testet för hepatit C, är det nödvändigt att kontakta en infektionssjukdomsläkare och en gastroenterolog för ytterligare diagnos och behandling.

Segmenterade neutrofiler sänktes

Barnets blodplättar är normala, förhöjda, sänkta

Tyreoidstimulerande hormon TGT

Diagnos av hepatit

Man kan inte direkt bestämma närvaron av hepatit i kroppen, eftersom inkubationstiden för sjukdomen kan vara upp till fyra veckor. När de första tecknen på sjukdomen uppträder, förekommer radikala förändringar i blodets sammansättning i den drabbade organismen: en biokemisk analys rapporterar ett allvarligt hälsoproblem och förekomsten av ett patogent virus. Men för att göra en slutgiltig diagnos är det inte tillräckligt att donera blod för hepatit, liksom en detaljerad diagnos av hepatit.

Laboratoriediagnos av hepatit

Det är önskvärt att utföra det efter slutet av inkubationsperioden, så att läkaren med yttersta precision kan bestämma leversjukan i kroppen. I annat fall kommer den föreskrivna behandlingen inte att ge den önskade terapeutiska effekten och till och med förvärra den rådande kliniska bilden.

Diagnos av hepatit A

Vanligtvis börjar diagnosen hepatit A med en detaljerad fråga om patienten och utnämningen av ett antal test som måste utföras så snart som möjligt. Detta är:

  • biokemiskt blodprov;
  • slutföra blodräkning
  • PCR-metod;
  • ELISA;
  • koagulation.

Om Botkins sjukdom utvecklas, observeras ett onormalt hopp av bilirubin, AlAT och AsAT, tymolprov enligt resultaten av biokemisk blodanalys. Vidare produceras specifikt anti-HAV IgM, vilket är ett oregerbart faktum av närvaron av hepatit A.
I allmänhet bestäms blodets analys av nedgången av leukocyter, hoppet i ESR och lymfocytos. Och ändå är den mest tillförlitliga PCR-metoden, vilken bestämmer indikatorn för det patogena virusets RNA.
Dessutom studerar läkaren symtom på sjukdomen, varefter den kan göra en slutlig diagnos och bryta igenom till den mest effektiva behandlingen. Behovet av instrumental examination är extremt sällsynt. Efter framgångsrik konservativ behandling under sjukhusstillstånd och karantän hos patienten väntar en slutgiltig återhämtning, och hepatit A återkommer inte igen.

Diagnos av hepatit B

Att bestämma närvaron av hepatit B-virus är också möjligt enligt resultaten från laboratorietester, och för det första krävs det att donera blod till hepatit. Av naturen har det patogena viruset tre huvudantigener - HBsAg, HBcAg och HBeAg, till vilka antikroppar produceras i kroppen. Huvuddragen i denna kliniska bild är ELISA - ELISA, som bara avslöjar specifika markörer av hepatit B.
Omedelbart bör det förtydligas att antigenet HBsAg framträder i blodet redan före de första symptomen på hepatit och bestäms på ett tillförlitligt sätt i isterperioden. Ett negativt test utesluter emellertid inte förekomsten av hepatit B, och kräver därför användning av en lika effektiv polymeras kedjereaktionsmetod (PCR).
Om du misstänker att hepatit B är obligatoriskt är ett biokemiskt blodprov, vilket rekommenderas att passera i första hand. Utför biopsi i levern och ultraljud i bukhinnorna diskuteras individuellt men när sjukdomshistorien är mycket tydlig är det inte nödvändigt med kliniska undersökningsmetoder.

Levereko-gram i autoimmun hepatit vid stadium av kronisk hepatit

Diagnos av hepatit C

För att göra denna diagnos är det inte tillräckligt att donera blod till hepatit, eftersom viruset kan råda i kroppen i latent form. Och likväl är de viktigaste laboratorietesterna alla analyser som presenteras ovan, liksom den extra prestationen hos en leverbiopsi. Denna mikroskopiska undersökning av biologiskt material (i vårt fall en del levervävnad) bestämmer omfattningen av den patologiska processen och vävnadsfibros. Materialprovtagning utförs under lokalbedövning, komplikationer av ett sådant förfarande är extremt sällsynta inom medicinsk praxis.
Om misstänkt hepatit C är, är huvudmetoden för klinisk undersökning en ultraljud av peritoneala organ. Anledningen är enkel: sjukdomen manifesteras ofta av en visuell förändring i den drabbade leveren, förändringar i dess struktur och storlek. På så sätt kan du bestämma:

  • storleken på levern, mjälte, bukspottkörteln och gallblåsan;
  • patologiska förändringar i dessa organ
  • generellt blodflöde i peritoneala organ
  • optimal area för att utföra en leverbiopsi.

Denna metod för klinisk undersökning bestämmer alla fokala patologier hos ett organ på mikroskopisk nivå. Om levern är representerad på skärmen i gråskala krävs omedelbar biopsi, eftersom den grå färgen visualiserar de drabbade vävnaderna från "mänskligt filter".

Förebyggande av hepatit

Eftersom sjukdomen inte uppenbarar sig omedelbart, ligger den långt ifrån alla kliniska bilder som går vidare till omedelbar behandling. Patienten kan helt enkelt inte vara medveten om förekomsten av ett patogent virus i kroppen, som i sin tur sprider sig snabbt in i blodomloppet och infekterar friska leverceller.
För att undvika ett sådant tragiskt öde rekommenderas det att följa alla förebyggande åtgärder. Sådan vaksamhet kommer att avsevärt minska risken för sjuklighet och rädda dig från allvarliga hälsoproblem i framtiden. De grundläggande reglerna för förebyggande presenteras nedan:

  • tvätta händerna efter gatan;
  • att omfattas av högkvalitativ bearbetning färska grönsaker och frukter;
  • att genomföra alla förebyggande vaccinationer som anges i den årliga kalenderplanen
  • selektiv attityd till sexuella partners;
  • Undvik kontakt med sjuka människor.
  • Använd endast engångssprutor och var särskilt vaksam hos blodtransfusionsstationerna.

Det rekommenderas också att regelbundet (en gång var sjätte månad) donera blod för hepatit, för att säkerställa att viruset inte tränger in i kroppen och inte smittar in de en gång friska levercellerna. Om diagnosen är bestämd måste den omedelbart bli ett dispensarkonto och följa alla rekommendationer från en specialist.

Publikationsförfattare:
Syropyatov Sergey Nikolaevich
Utbildning: Rostov State Medical University (Rostov State Medical University), Institutionen för gastroenterologi och endoskopi.
gastroenterolog
Doktor i medicinska vetenskaper

ELISA-metod för att detektera hepatit

Modern medicin är känd för många leversjukdomar. HCV (viral hepatit C) är bland de vanligaste och farliga eftersom denna infektion ofta utvecklas asymptomatiskt och leder till kritiska komplikationer, även döden. Det är därför avgörande att den tidiga diagnosen av sjukdomen, som utförs med olika metoder, inklusive enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA) för att detektera antikroppar mot viruset i blodet.

Uttalande av HCV-infektion för diagnos av hepatit

I laboratoriediagnostik för detektering av hepatit C (HCV-infektion) används två typer av metoder:

  1. Serologisk, baserat på detektion av antikroppar mot hepatit C-viruset (anti-HCV), även kallat ELISA (enzymbunden immunosorbentanalys). Det syftar till att detektera anti-HCV (IgM och IgG markörer) som används för screening och för diagnos av hepatit C. Båda dessa markörer kan detekteras i blodet (plasma) i olika kombinationer, vilket kräver en korrekt klinisk tolkning. För att bekräfta förekomsten av anti-HCV utförs ett RIBA-test (rekombinant immunoblot).
  2. Molekylärbiologisk, riktade mot detektering av RNA-virus. HCV RNA-testet är ordinerat för följande kategorier av patienter:
    • med identifierad anti-HCV;
    • utan detekterade anti-HCV, men med etablerade epidemiologiska och kliniska data som kräver uteslutning av den akuta formen av HCV.

RNA av viruset kan detekteras i blodet så tidigt som 14 dagar efter infektion, det vill säga före utseendet av anti-HCV som inträffar under de första 2-3 månaderna.

För slutlig bekräftelse av diagnosen (speciellt när endast en av de två markörerna för HCV-infektion upptäcks), rekommenderar experter att efter en viss tid bör upprepade tester av anti-HCV och HCV RNA utföras.

Detektion av hepatit genom ELISA

För genomförandet av tidig diagnos av viral hepatit, speciellt asymptomatiska, anicteriska former i serum detekteras närvaron av virusproteiner (antigener) eller antikroppar mot dem (produceras av immunsystemet när virus träder in i kroppen) genom enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA). Detta är en universell metod för immunologisk diagnos, dess väsentlighet ligger i studien av interaktionen av "antigen-antikropp". Den används ofta i många länder i världen.

Bestämning av hepatit med ELISA gör det inte bara möjligt att fastställa en noggrann diagnos utan också att bedöma sjukdommens art samt att välja en kompetent och effektiv behandling med traditionella läkemedel (interferon, ribavirin), läkemedel med direkt åtgärd (Sofosbuvir, Daclatasvir) och deras generiska indiska och kinesiska produktion.

När det är möjligt kompletteras diagnosen av viral hepatit med ELISA med PCR (polymeraskedjereaktion), vilket medger att man kan bestämma närvaron av hepatitvirus i RNA.

Hur noggrann är enzymimmunanalysmetoden

Enligt expertbedömningar är noggrannheten hos ELISA-metoden 95%, det vill säga i 95 av 100 patienter som använder enzymimmunanalys, kan närvaron och mängden HCV-antikroppar - IgM och IgG detekteras i blodet. Om resultatet är positivt är det möjligt att diagnostisera HCV-kontakt med kroppen (inte själva viruset, nämligen närvaron av antikroppar i blodet till det, vilket kan vara resultatet av en redan överförd sjukdom).

Trots den höga känsligheten hos den enzymbundna immunosorbentanalysen (ELISA), kan 40 procent av patienterna med ett positivt resultat inte detektera viruset, vilket indikerar ett tveksamt eller falskt positivt resultat.

För att bekräfta riktigheten av ELISA-resultaten används RIBA (rekombinant immunoblotting) -metoden för att noggrannare studera detektion av antikroppar mot HCV.

Anti NCV kärnprov

Effektiva studier för att bestämma närvaron av antikroppar mot hepatitvirus innefattar en anti-HCV-kärna, som används som ett bekräftande test när "osäkra" resultat erhålls.

Om anti-HCV-kärnan detekteras i serum vid en utspädning av 1: 1000, är ​​det troligt att ett positivt resultat kommer att diagnostiseras, det vill säga sjukdomen är närvarande.

Om proverna vid en utspädning av 1: 1000 är negativa, vid en utspädning av 1: 200 är positiva, behövs forskning för förekomsten av viralt RNA. I det här fallet är det troligtvis ingen HCV-infektion.

Det är viktigt att förstå att i kroniska former av HCV detekteras konstant antikroppar, och vid eliminering (avlägsnande från kroppens celler) av viruset kvarstår de i 4-8 år eller mer. Därför indikerar förekomsten av anti-HCV inte alltid infektion i kroppen och tillåter inte att göra objektiva slutsatser om processens aktivitet. För att erhålla noggranna uppgifter om viral belastning, grad av leverskada, infektionens varaktighet och skillnaden mellan akuta och kroniska former av sjukdomen rekommenderas att man använder definitionen av spektrum av antikroppar mot olika HCV peptider. Det är också viktigt att observera sin kvantitativa och kvalitativa dynamik.

ELISA-analys - från screening för HbsAg till komplex diagnostik

Med introduktionen av modern teknik inom medicin, växer möjligheterna med immunokemiska diagnostiska metoder, som snabbt och korrekt kan känna igen sjukdomen, när andra metoder är maktlösa. Förståelsen att hepatit B-viruset kan ligga i kroppen i en mycket låg koncentration, vid vilken den inte kan detekteras även med en tillförlitlig metod som PCR, gör det nödvändigt att ta en ny titt på problemet med att diagnostisera denna sjukdom och att uppskatta möjligheterna till en immunanalys.

I detta material kommer vi att analysera i detalj allt som relaterar till denna typ av laboratorieforskning. Du kommer att lära dig vad ett enzymimmunoassay är och hur det utförs, vad det australiensiska antigenet är och hur det bestäms, vilka oförståliga förkortningar Hbs ag, Hbcor, i genomsnitt och deras roll i att dechiffrera analysen, samt få mer användbar och intressant information.

Artikelns innehåll:

Allmän information om ELISA

ELISA (förkortad ELISA) är en laboratoriediagnostisk metod som kan detektera både antigener och antikroppar från en mängd olika infektioner, inklusive hepatit B. Nuvarande kunskaper om virusets egenskaper och egenskaperna hos kroppens immunsvar möjliggör inte bara att upptäcka infektionen utan även identifiera den stadium, effektivitet av vaccination och utvärdera effektiviteten av behandlingen.

Kärnan i enzymimmunanalys

ELISA är baserad på reaktionen "antigen-antikropp" eller snarare dess egenskaper.

Som svar på invasionen av ett främmande ämne (antigen), som i synnerhet är proteiner från viruset, producerar kroppen skyddande proteiner - antikroppar. Antikroppar går in i en komplex reaktion med antigenet, vilket blockerar sin aktivitet.

Vi kommer att prata mer om antigener och antikroppar nedan, men nu ska vi notera att för varje antigen finns det strikt individuella eller som läkare säger homologa antikroppar. Således, om vi vill detektera ett specifikt antigen i blodet, kommer vi att använda en diagnostisk tablett med antikroppar mot den. Om det finns ett antigen i blodet kommer det att reagera med antikroppar, vilket kan detekteras på olika sätt. Och vice versa. Om vi ​​vill hitta några antikroppar behöver vi en tablett med lämpligt antigen.

Oftast är det diagnostiska värdet av björnen bara de antikroppar som du kan diagnostisera nästan vilken infektion som helst. Det är dock sällan hos hepatit B-viruset att huvudrollen i diagnosen spelas av en av antigenerna - det australiensiska antigenet.

Hur är IFA

Tänk på ett typiskt ELISA-förfarande för ett specifikt exempel när du vill identifiera antikroppar mot patogenen.

För diagnostik används en tablett med 96 brunnar, vilka är förmättade med motsvarande antigen. Vidare är proceduren följande:

serum appliceras på alla celler;

homologa antikroppar reagerar med antigenet och fäster på plattan;

tabletter tvättas, avlägsna oanvända antikroppar;

då införs en enzymatisk etikett i cellerna - ett ämne som reagerar med antikroppar och orsakar färgning av cellens innehåll.

Detta är standard ELISA-förfarandet med färgning, vilket exempelvis används i immunokromatografiska testremsor.

ELISA är inte begränsat till den kvalitativa bestämningen av patogenens antikroppar eller antigener. Ju fler antikroppar finns i tablettens celler, desto intensivare är den färgade lösningen. Genom att jämföra sin optiska densitet med kontrollen kan modern utrustning helt noggrant beräkna antikroppskoncentrationen per volymenhet. Således utförs en kvantitativ ELISA, mätmåttet vid vilken oftast enheterna optisk densitet (EOP).

Immunokemiluminescerande analys

Idag finns det flera dussin typer av ELISA, som var och en har ett föredraget omfång. Den mest populära i diagnosen hepatit B är immunokemiluminescerande analys.

Den enzymatiska etiketten för denna analys är inte kromatiner, som i standard ELISA, men speciella ämnen - fosfor som gör att komplexet lyser i ultraviolett ljus.

Med hjälp av en speciell enhet - luminometer kan du exakt bestämma utsläppsnivån och följaktligen koncentrationen av den önskade substansen.

Med hjälp av ELISA-metoder bestäms nästan alla befintliga antigener av hepatit B-viruset och antikroppar mot dem.

Hepatit B-virusantigener: Hbs, Hbe och Hbc

Termen antigen (antigen) kommer från två engelska ord: antikropp - antikropp och generator-tillverkare. Under antigenet förstår man alltså substans som orsakar bildandet av antikroppar i kroppen. De vanligaste antigenerna är proteinföreningar.

Idag är tre antigener av hepatit B-viruset kända: hbsag, hbc och hbe.

Australiskt antigen

Proteinet som är en del av det yttre skalet hos patogenhepatit B detekterades långt före upptäckten av själva viruset. Detta antigen fick sitt namn eftersom det först identifierades från de inhemska invånarna i Australien. Men i början betraktades proteinet inte som ett antigen, utan ett helt normalt element av blod bland infödingarna, och medvetenheten om dess samband med leversjukdomar kom lite senare.

Långsiktigt bevarande av antigenet i blodet och frånvaron av antikroppar indikerar möjligheten att bilda HBeAg-positiv kronisk hepatit B

I dag i den professionella litteraturen heter "Australian antigen" praktiskt taget inte och har ersatts av den internationella förkortningen - HbsAg (hepatit b-ytantigen - hepatit B-ytantigen). Dessutom kan du hitta förkortningar hbs antigen eller bara hbs. Några av dessa förkortningar är acceptabla och kan kompletteras med inspelning av HBV eller HBV - hepatit B-viruset (hepatit b-virus).

Hepatit B-virusytantigenet har en anmärkningsvärd funktion som gör den till en oundgänglig diagnostisk markör - dess koncentration i blodet kan nå mycket höga nivåer, upp till en halv milligram per milliliter blod. Detta beror på att endast en liten del av nya HBsAg, som bildas under reproduktionen av hepatit B-viruset, går till byggandet av membran av nya virala partiklar och resten - cirkulerar fritt i blodet. Som ett resultat kan antalet hbs partiklar i blodet överstiga antalet virioner hundratusentals gånger.

Denna funktion gör det australiensiska antigenet huvudmarkören i screeningsdiagnosen av hepatit B, som finns i blodet så tidigt som 4-6 veckor efter infektion. När antikroppar bildas, ersätts ytantigenet gradvis av dem. Om HBsAg efter 6 månader kvarstår, indikerar detta infektionens övergång till kronisk form.

Nyligen, när det blev möjligt att bestämma koncentrationen av hbs hbv, har dess roll i diagnosen ökat ännu mer, eftersom man med utgångspunkt i nivånivån kan skilja kronisk hepatit B (HBV) från ett friskt bärartillstånd samt övervaka effekten av behandlingen.

Kärnantigener

I kärnan av viruset - nukleokapsid - är proteiner som styr reproduktionen av viruset HBcoreAg och HBeAg.

HBcoreAg, som även kan kallas HBCore-antigen, hbc eller kärnantigen, kan bara hittas i leverns vävnader, direkt i kärnorna i hepatocyter. Detta antigen detekteras inte i blodet och har inget diagnostiskt värde.

Strukturen av hepatitviruset

HBeAg (HBe, HBprecoreAg) - tvärtom spelar en viktig roll i diagnosen. HBeAg och HBcoreAg är nära släktingar. De har en stor likhet med strukturen och skiljer sig huvudsakligen från molekylernas rumsliga position. Till skillnad från HBcore är HBe inte en del av nukleokapsidväggen och cirkulerar fritt i blodet.

HBe-rollen i den smittsamma processen är ännu inte tillräckligt tydlig, men egenskaperna hos dess beteende och deras förhållande till den smittsamma processen har redan studerats tillräckligt. HBeAg indikerar aktiv reproduktion av viruset och låter dig på ett tillförlitligt sätt bestämma fasen av kronisk CHB-HBeAg-positiv eller HBeAg-negativ.

HBe kan detekteras i blodet redan i inkubationsperioden för akut hepatit B-virus (HBV), medan en hög koncentration av HBeAg i 3 veckor sannolikt indikerar ett hot om kronisk process. Koncentrationen av HBe är direkt relaterad till innehållet av danskpartiklar (så kallade hepatit B-viruspartiklar) - ju högre mängden HBe desto högre koncentration av HBV-DNA i blodet.

HBeAg är en viktig markör för sjukdomens infektiöshet. Blodet hos HBeAg-positiva patienter är mycket mer smittsamt än HBeAg-negativt. Till exempel når sannolikheten för överföring av infektion till barnet hos gravida kvinnor positivt för HBe och Hbs 50%, medan sannolikheten för en sådan händelse i HBe-negativa men Hbs hos positiva mödrar är 10-30%.

Hbe bestämmer förloppet av kronisk hepatit. HBeAg-positiv kronisk hepatit B har en mycket mer ogynnsam prognos när det gäller utveckling av cirros.

Det är nog allt du behöver veta om HBV-antigener, och vi går vidare till den andra gruppen av hepatit B-markörer - antikroppar.

Vad betyder ett positivt eller negativt MKB-resultat för hepatit C?

För att noggrant bestämma typen av hepatit efter en preliminär diagnos, för att förutse sjukdomsförloppet, för att fastställa utvecklingsstadiet används olika serologiska studier. De mest exakta uppgifterna erhålls efter enzymimmunanalysen. Användning av ELISA hepatit C, diagnostiserad i 95% av fallen. Det är denna analys gör det möjligt att detektera antikroppar antivirus hepatit C (HCV antivirus) och bedöma inte bara graden av aktivitet av patologisk process, utan också nivån av effektiviteten av antiviral terapi, som föreskrivs av en läkare och utförs av under dess kontroll.

När forskning behövs och dess funktioner

Hepatit C är den farligaste typen av denna sjukdom, eftersom den har en lång latent (latent) period och farliga konsekvenser. För att undvika utseende och utveckling av korrekt och snabb diagnos möjliggör en av de mest informativa metoderna som är erkänd immunanalys.

Bekräfta närvaron genom att använda serologiska markörer och erhålla den mest kompletta och korrekt information om förekomsten av antikroppar kan analys, som är baserad på en uppsättning av strukturella och icke-strukturella peptider i HCV-virusinfektion patientens blod. Hos friska personer saknas antikroppar mot hepatit C-viruset i patientens blod, och deras detektering indikerar närvaron av en patogen och utvecklingen av en patologisk process.

Under studiens gång identifierar experter totalt IgM- och IgG-antikroppar som är direkt relaterade till HCV-strukturella och icke-strukturella proteiner. Att genomföra denna studie gör de tidiga stadierna av sjukdomen för att identifiera patienter infekterade med hepatit C. Närvaron av den totala antikroppar i blodet indikerar början av en sjukdom eller överföras infektion.

Uppkomsten av sjukdomen indikeras av närvaron av IgM-klassantikroppar, och typ C-hepatit kan bedömas av de detekterade IgG-klassantikropparna. De blir bekräftelse på omvandling (sjukdomens sista skede). För denna period är anatomisk och funktionell återhämtning av de drabbade organen karakteristisk.

Tidigt genomförd ELISA (ELISA) gör att du kan identifiera den patologiska processen i ett tidigt utvecklingsstadium, diagnostisera sjukdomen med hög noggrannhet och öka chanserna för snabb återhämtning. ELISA-testet gör det möjligt att bestämma inte bara närvaron av viruset utan även antalet specifika totala antivirusantikroppar.

  1. Kvinnor i graviditetstillstånd vid registrering i förlossningskliniken.
  2. Patienter som har symptom på akut eller kronisk hepatit.
  3. Medicinska experter som ständigt är i kontakt med biologiska material.
  4. Patienter med diagnos av AIDS.
  5. Drogmissbrukare.
  6. Patienter med alkoholism och de som leder en asocial livsstil.

Hänvisning till ELISA-testet (enzymimmunanalys) och få brottsbekämpande tjänstemän eller anställda av offentliga tjänster. Behovet av en ELISA inträffar om du misstänker en kränkning av leverns funktionalitet eller när du får tvivelaktiga uppgifter om organets tillstånd efter ultraljud. Läkaren kan ge patienten en hänvisning till ett ELISA-blodprov om den senare ska genomgå ett komplext kirurgiskt ingripande. Om en kvinna (särskilt över 30 år) planerar en graviditet, och förhöjda värden av bilirubin eller transferas (ALT, AST) finns i blodprovet.

Specifika anti-virala IgG-antikroppar har detekterats i flera år. Deras koncentration minskar gradvis, vilket bekräftar den positiva dynamiken. När det gäller kronisk hepatit C förändras inte antalet totala anti-HCV-antikroppar i detta fall. Noggrann diagnos baseras på att bestämma nivån av IgM antikroppar.

Förloppet av hepatit C beror på genotypen av viruset som orsakade utvecklingen av sjukdomen. 11 moderna medicinska sorter är kända. I de svåraste situationerna är infektion med flera genotyper av viruset möjligt, och en av dem visar sig alltid vara dominerande. Endast noggrann diagnos hjälper till att välja de mest effektiva drogerna för effektiv terapi, välja dosering och bestämma varaktigheten av terapeutiska ingrepp.

Utvärdering av forskningsresultat

För diagnos av misstänkt förekomst av hepatit C och mottagning av information som indikerar kvaliteten på och kvantiteten av medlet genom immunosorbentanalys (ELISA), i vilket de sakkunniga får bekräftelse av närvaron av viruset i kroppen och kan bedöma dess aktivitet.

Med denna studie kan vi dra slutsatser om:

  • viral belastning;
  • risken att utveckla en kronisk process
  • aktiviteten för reproduktion (replikation) av HCV RNA-molekylen;
  • varaktigheten av den patologiska processen
  • graden av leverskador.

Risken för att sjukdomen blir kronisk utvärderas också. Identifierad med hjälp av ELISA antivirus HCV antikroppar indikerar viral replikation. De slutliga resultaten kräver bekräftelse med mer exakt forskning.

Kvalitativ bedömning av resultatet av enzymimmunanalysen uttrycks som ett positivt eller negativt resultat. ELISA möjliggör detektering av hepatit C vid ett tidigt utvecklingsstadium av sjukdomen såväl som under sjukdomsförloppet i anicterisk form.

Analysen har vissa fördelar, bland annat:

  1. Noggrannhet för kvalitativa och kvantitativa indikatorer.
  2. Minsta studietid.
  3. Fasetest.

Immunosorbentanalys tillhör undersökningarna är korrekt, men trots alla fördelar i vissa fall inte möjligt att identifiera patogenen närvarande i människokroppen.

För forskning tar laboratorieassistenten patientens blod i blodet och placerar det i speciella behållare. Efter en viss tid är antigenerna (främmande mikroorganismer) fästa vid kärlens väggar. Specialisten sätter in immunoglobuliner (antikroppar) i kärlet och söker ett immunsvar.

De erhållna resultaten jämförs med data från ett speciellt sammanställt bord. Resultatet utvärderas som:

Positivt, vilket indikerar närvaron av en akut form av sjukdomen, om närvaron av antikroppar av klasserna IgA, IgG, IgM bestäms under blodprovet.

Negativ - alla tre typer av antikroppar upptäcktes inte, är frånvarande.

Falskt positivt - ELISA-resultatet är positivt, men inte bekräftat efter PCR (polymeraskedjereaktion).

Tvivelaktiga - markörer i blodet detekteras inte i närvaro av hepatit C. Detta är möjligt med för tidig diagnos. Upprepad analys efter 2-3 veckor krävs. För en noggrann diagnos gör du PCR-analys.

Ett falskt negativt resultat av analysen är möjlig hos patienter som tar läkemedel som har en inhiberande effekt på kroppens försvarssystem.

Både falska positiva och falska negativa resultat av analysen är möjliga av flera anledningar. Först och främst är det den minsta virala belastningen i början av sjukdomsutvecklingen. Lika viktigt är tillståndet för patientens immunförsvar och kroppens individuella egenskaper. Resultaten av studien påverkar signifikant administrationen av läkemedel bland immunosuppressiva ämnen.

Det är omöjligt att vara helt säker på exaktheten av resultatet av en enzymimmunanalys, om patienten är en kvinna i graviditetstillstånd. Falska resultat är möjliga i fall där analysen utförs för patienter som lider av autoimmuna sjukdomar, onkologiska sjukdomar med godartade tumörer.

Ytterligare forskning utförs om patienten nyligen har haft en allvarlig infektionssjukdom, han har diagnostiserats med en metabolisk störning eller ett funktionsstörning i det endokrina systemet. Om blodets sammansättning ökade nivåer av heparin eller signifikant reducerade nivåer av spårämnen.

Analysens noggrannhet kan ökas genom att följa de befintliga reglerna för förberedelser för leverans:

  1. Blod doneras endast på tom mage. Den sista måltiden är tillåten minst 8-10 timmar innan materialet samlas in.
  2. På kvällen måste man, före analysen, neka att äta feta, stekta, kryddiga, röka produkter och rätter.
  3. Det kan inte prata om att dricka alkohol.
  4. Det är bättre att sluta röka dagen före bloddonation.

Enzymbunden immunosorbentanalys kan endast göras för de patienter som för närvarande inte har förkylningar, inflammatoriska eller infektionssjukdomar, klagar inte över oändligheten.

Brott mot de angivna reglerna och kraven leder till att analysresultatet utvärderas som falskt positivt. Denna situation utvecklas i 15-20% av fallen. Men för fullständigt förtroende hänvisar läkare till patienter för ytterligare undersökning, under vilka de behöver donera blod för PCR.

Polymeraskedjereaktion

Diagnos är inte möjlig endast på grundval av resultaten från ELISA analysen. Förekomsten av antikroppar är inte bevis på förekomst av ett patogent virus i kroppen vid tidpunkten för studien. Felaktig testning kan ge upphov till en nervös uppdelning eller ännu mer akut reaktion hos patienten. Diagnosen baserat på resultaten från ELISA är inte korrekt. Ytterligare forskning behövs, vars resultat kommer att ge doktorns slutliga dom.

Det är viktigt att komma ihåg att ett falskt positivt testresultat är möjligt hos personer som för närvarande lider av andra infektionssjukdomar, men deras immunförsvar svarade inte korrekt på patogenernas eller virusens penetration i kroppen.

Diagnos av hepatit C möjliggör ett antal laboratorietester, en speciell plats bland vilken är enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA). Kvalitativ bedömning av indikatorer definieras som ett positivt eller negativt resultat. Frånvaron av hepatit B-virus i patientens blod är normen, men i vissa fall, efter studien, säger experter att obetydliga koncentrationer av vissa RNA-fragment (ribonukleinsyra) har hittats i biologiskt material. Identifiera dem med PCR (polymeras kedjereaktion).

Detta blodprov gör det möjligt att identifiera orsaksmedlet för hepatit C vid ett tidigt stadium av sjukdomsutvecklingen och att göra en diagnos med hög noggrannhet. Studien bygger på det faktum att virus har DNA-molekyler (hepatit B) eller RNA (hepatit C) i sin struktur.

Under analysen av PCR användes en speciell behandling av patientblodprover:

  • öka koncentrationen av nukleinsyramolekyler;
  • bestämma deras typ
  • fastställa typ av patogen.

Om det finns en liten mängd patogen-RNA-fragment i humant blod, kommer alla att detekteras av PCR. Detta gör det möjligt att göra en noggrann diagnos. Den största skillnaden i denna analys från alla andra forskningsmetoder är 100% noggrann diagnos.

Denna analys utförs i studien av blodet hos gravida kvinnor som tillämpade på antiklinik för registrering med misstänkt hepatit C med lång latent (latent) period, med svårighet att göra en noggrann diagnos med ELISA. PCR är nödvändigt i fall där ett tvivelaktigt resultat har erhållits efter en enzymimmunanalys.

Hepatit C-viruset i denna situation ligger i patientens kropp, men har ännu inte provocerat den snabba utvecklingen av sjukdomen. Detta är den latenta kursen av sjukdomen. Analysen görs ganska snabbt, eftersom det inte finns något behov av att odla patogenen med hjälp av ett näringsmedium för att få resultatet. Huvudskillnaden mellan PCR och enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA) är att i den här studien finns det inte något sådant som ett falskt positivt eller tveksamt resultat.