Veterinärteknik

Leukocytantal
Beräkningen av leukocytformeln utförs med användning av ett nedsänkningsmikroskopssystem. På grund av det faktum att i ett utstryk olika typer av leukocyter är anordnade oregelbundet (monocyter och neutrofiler - företrädesvis längs de övre och undre längsgående kanterna på preparatet, och lymfocyter - närmare dess centrum), var leukocyter utfördes med användning av följande riktlinjer. Under en liten förstoring av mikroskopet hitta kanten av ett blodsprut nära den resulterande borsten. Vid smutsens längsgående kant appliceras en droppe nedsänkt olja, och sedan är läkemedelsplanet fokuserat. Observera in i okularet, dra tillbaka 2 - 3 synfält mot mitten av smeten. Fortsätt sedan befordran av drogen i samma riktning för ytterligare 3-5 synfält, i varje av dem räknar de tillgängliga leukocyterna. Därefter avanceras en smet på 3-5 synvinklar längs längdkanten, ändrar riktningen för slagförflyttning i rätt vinkel, återgår till slagkanten, framkallar en stroke med ytterligare 3-5 synfält och så vidare. Zigzag-linjen där blodsmältning är avancerad kallas Meander-linjen.
___ ___
| ___ | | ___ |

Räkning fortsätter tills 50% av cellerna har räknats. Räkningen fortsätter sedan på motsatt sida av smeten. Som beskrivet ovan räknas alla vita blodkroppar som hittas i det visuella fältet, när ett smet fortskrider. Räkningen avslutas när summan av de vita blodkropparna är 100. I den andra beredningen av patienten räknas ytterligare 100 leukocyter. Registreringen av vita blodkroppar i beräkningen görs med en 11-tangent SL-1-räknare, och den totala mängden och kvantiteten av varje typ av vit blodcell erhålles i procent. I avsaknad av en räknare görs registrering genom att skriva på ett pappersark. Vertikal inspelade första bokstäverna i namn metamyelocyter leukocyter (mtmts.), Stab (n.), Segmenterad (s), eosinofil (e.), Basofila granulocyter (f.), Lymfocyter (lymfa.), Monocyter (SME.), Plasma celler (pl.).
Procentandelen av olika typer av leukocyter återspeglar inte deras sanna tal i 1 1 blod, därför beräknas det absoluta innehållet av leukocyter i 1 1 blod. för att göra detta måste du veta antalet leukocytoner i 1 liter blod, andelen av deras individuella arter, beräknad i det färgade preparatet.
Till början
Indikatorer leykoformuly friska djur

Guide till praktisk träning om metoderna för klinisk klinisk laboratorieforskning: Proc. Manuell 4: e upplagan, Pererab. Och ytterligare. -W. Ronin, G.M. Starobinets.-M.: Medicine, 1989.-320s.

Leukocyt blodtal

Procentandelen av en viss typ av leukocyt kommer att förändras med en ökning eller minskning av innehållet hos andra arter. Vid avkodning av leukocytformeln måste man ta hänsyn till det absoluta antalet leukocyter.

5 huvudtyper av leukocyter

Förhållandet mellan fem huvudtyper av leukocyter reflekteras i leukocytformeln:

Leukocytformel för en vuxen frisk person (norm):

Avvikelser från normen i leukocytformeln betecknas vanligtvis av följande termer:

med en ökning i nivån av en specifik typ av leukocyter, tillsätts änden "oz" ("ez") eller "oi" till dess namn. Till exempel lymfocytos, eosinofili, monocytos, etc.
med en minskning i nivån, läggs slutet på "sången" till namnet på leukocyterna. Till exempel lymfopeni, neutropeni, eosinopeni etc.

Använd också begreppen leukogram shift vänster och höger:

Skiftet till vänster om leukogrammet visar en ökning av antalet omogna (stabila) neutrofiler, liksom utseendet av metamyelocyter (unga) och myelocyter.
Växlingen till höger leukogram visar en minskning av det normala antalet stabila neutrofiler, en ökning av antalet segmenterade neutrofiler med hypersegmenterade kärnor.

Exempel på att lösa problem på ämnet "leukocytformel"

x (eosinofiler) = N (eosinofiler) • 100 / N (leukocyter)%

x (basofiler) = N (basofiler) • 100 / N (leukocyter)%

x (neutrofil) = N (neutrofil) • 100 / N (leukocyt)%

x (lymfocyter) = N (lymfocyter) • 100 / N (leukocyter)%

x (monocyter) = N (monocyter) • 100 / N (leukocyter)%

2) En ökning av antalet basofiler och speciellt eosinofiler indikerar möjligheten till en parasitisk infektion eller en allergisk sjukdom. Med tanke på resultaten av analysen och med hänsyn till patientens klagomål kan utvecklingen av bronkialastma antas.

Beräkning av leukocytformeln

Antalet leukocyter - 12,4 x 10 9 per 1 liter (12,4 g / 1)

neutrofiler: myelocyter - 0%

Polychromatofili av erytrocyter, enda normoblaster.

Baserat på tillgängliga data, avslutar vi:

Hypokromisk anemi (hemoglobinkontroll och antal röda blodkroppar reduceras, färgindex är 0,6); regenerativ (märkt retikulocytos, polychromatofili av erytrocyter och normoblastos); normoblasticheskaya; Normocytär.

Förändringar myeloid känne neutrofil leukocytos (absolut neutrofili), och neutrofil regenerativ vänsterskift (ökad absolut och relativa innehållet av unga och band neutrofiler).

Det absoluta och relativa innehållet av basofiler, eosinofiler och monocyter i det normala intervallet; relativ lymfopeni kombineras med normal absolut lymfocytinnehåll.

Således detekterades anemi med tecken på rött blodregenerering, neutrofilt leukocytos, vilket förmodligen är ett uttryck för den skyddande restorativa reaktionen hos det hematopoietiska systemet. Den funktionella aktiviteten hos benmärgshematopoiesis ökar.

Som ett av exemplen i patologi, i vilken blodet sådan bild är möjlig, kan det kallas ett tillstånd efter akut blödning i fas hög medullär hematopoies (retikulotsitarnogo krisen), därför, i detta fall, hemorragisk anemi, akuta fasen av ökat för benmärgs hematopoies.

Anteckningar laboratorium. Leukocytformel

Information om vad som är leukocyt blodformel, överflöd. Det finns egenskaper hos enskilda representanter, och deras funktioner, exempel i antal av norm och patologi. Jag vill prata om hur historien börjar, vad som händer innan siffrorna visas i procent (och i absoluta tal) på formuläret.

En liten droppe blod smutsas på glidglaset med ett andra glas (med en polerad kant för att inte skada cellerna) så att en "borste" erhålls från en kant - det tunnaste lagret av smetet, där samma "formel" kommer att beräknas.

När blodet torkar börjar färgprocessen själv (det har ett namn enligt författaren, men metoderna för färgning av droger (och inte bara blod utan även urinsediment, sputum och många saker!) Valda, beroende på vilket cellstruktur eller till och med mikrober behöver fokusera. blodprodukter av formel för beräkning färgade färgämnen, av vilka en är koncentrerad nog, så den späddes med destillerat vatten (inte vatten från kranen, eftersom kranvatten har ett alkaliskt pH, det abso-celler yutno inte måla över - fångad på denna spirande tekniker).

I laboratoriet, i allmänhet, är alla reagens späddes med destillerat vatten (något alkalize det är önskvärt, eftersom vatten har en D-svagt sur reaktion och färgningsblodberedningar behöver vatten med ett neutralt medium), helt utan föroreningar upplösta substanser och spårelement - detta beror renhet reaktioner, och vissa enheter (analysatorer) kan i allmänhet misslyckas med kranvatten.

Det finns supermoderna anordningar för att arbeta med blodanalysatorer, där processen för utseendet av leukoformuly är fullständigt robotiserad, står personen helt enkelt i närheten och följer denna process från utsidan. Jag skulle jämföra det med en tårta bakad av händerna på en man hemma och köpte i affären :). En flaska färg kan till exempel ha ofullständig färgintensitet i olika partier eller från olika tillverkare, och en person med manuellt arbete kommer lätt att lätt nå en optimal färgtid och förhållandet mellan D-vatten och färg kommer att upplevas. Laboratorieassistenten (oftare den medicinska assisterande laboratorieassistenten) målar utstrykningarna av den framtida Pappenheim-formeln, och han är intresserad av att alla cellstrukturer är perfekt färgade, eftersom Dessa "landskap" i mikroskopet till honom ser senare också ut, och visar ibland till kollegor från andra (bättre än referens) laboratorier om han tvivlar på någonting.

Värdet av leukocytformeln är mycket stort och inte bara i hematologisk patologi. Även om 95% av smuts kommer att vara vanligt och förståeligt, men de återstående 5% kan åtminstone överraska! Som de säger, åh, de 5%!

Efter färgning torkas glasögonen helt, en droppe nedsänkt olja appliceras på "borst" -området - och du kan redan beundra en person förstorad 1000 gånger! (Om så önskas, byter okularet och 1500 gånger!) Förresten är den totala ökningen i mikroskopet en produkt som ökar linsen för att öka okularet. Mikroskop som är anslutna till en bildskärm kan "visa" dem som är omkring dem vad laboratorie tekniker ser för sakramentet. Du kan också fotografera enskilda synfält med ett musklick. Jag tycker att det är ganska logiskt i de laboratorier där det finns möjlighet att ta ett foto av mikroskopi, för att bifoga bilder av patologiska celler i formuläret - detta kommer att ge ytterligare tips till den behandlande läkaren. Det är vettigt att hålla sig i sådana bilder och i sjukdomshistorien, som röntgenstrålar. Det här och i fråga om försäkringsmedicin har sina fördelar.

Läkaren räknar och "sorterar" alla leukocyter i synfältet med hjälp av ett leukocytantal. Vanligtvis räknas 100 leukocyter. Men med komplexa patologier är det möjligt att räkna både 200 och 400 celler för att härleda ett extremt noggrant tal. Hemanalysatorer räknar många gånger antalet leukocyter, men den sällsynta apparaten tar endast hänsyn till storleken på cellerna, närvaron av kärnor, och inte morfologin (struktur och utseende). Det enklaste exemplet: Det skiljer inte lymfocyt från normocyten (erytrocyt med kärnan).

I centrum - normocyt.

Normalcyte (klockan 9) och lymfocyt (klockan 3) för jämförelse. Vid klockan 12 - segmenterad neutrofil.

Men det här är en så seriös patologi att jag bara kan ge dig råd om att leta efter ett laboratorium där manuell beräkning av formeln görs utöver resultatet av hemaanalysern.

Ett annat exempel på den "svaga länken" av hemanalysatorer: räkning av antalet blodplättar, som järnroboten "conjured" (han räknar stora blodplättar, mikroblock, fragment av röda blodkroppar och vita blodkroppar). Det otillförlitliga resultatet av KLA i hemianisarna kan vara med ett överskott av eosinofiler, förekomst av blaster, virocyter... Vad kan vi säga om malariaparasiterna i erytrocyterna (men det här är en helt separat historia). Och ju enklare apparaten är desto viktigare är tillgången på laboratorieläkare, som tyvärr många laboratorier försöker spara.

Förresten finns det en sådan indikator i hemosanalysatorer som ICSU (det används oftare som en felindikator), från vilken du kan bedöma hur enheten kalibreras. Om den överskrider 38 g / dl, bör du inte lita på en sådan analys, bättre återta blodet i ett annat laboratorium.

Hemanalysern producerar många, många parametrar (vanligtvis 20-31), men i regel är det i 80% av fallen i barnläkemedel den så kallade "troechki" (hemoglobin, leukocyter, ESR) med leukoformula som är tillräckligt för läkaren, bra om du också har CRP. Hela resten är mer intresserad av hematologer.

Jag skulle vilja läsa läsarnas uppmärksamhet på att om det finns lågt hemoglobin i KLA (vilket bekräftades ett par gånger) betyder det inte alls att järnberedningar visas. Först måste du klara testet för "serumjärn" (du kan med transferrin och OZHSS i ett fall, om ekonomin tillåter), för att utesluta andra typer av anemi (även om de är mycket sällsynta) och sedan (om järnbristanemi bekräftas) - "tugga på järn". Varför gnager du? Eftersom järn måste: 1) vara i oral form, 2) vara sulfat (och inte fumarat, glukonat, hydroklorid eller helt enkelt klorid), 3) vara divalent (och inte trivalent). Tja, om det läggs till drogen vitamin C (för att förbättra absorptionen). Det är intressant vad tillverkarna av järnhaltiga droger, vars komposition är den fullständiga motsatsen till dessa egenskaper, tänkte. Så vad? Motsägelsens ande? Dessutom föreskriver sådana värdelösa droger läkare för denna dag.

Titta igenom leukoformeln, doktorn re-kontrollerar hemoglobinet, antalet leukocyter, bedömer det "röda blodet" - alla de siffrorna som redan finns i formen eftersom elementär under blodprovtagningen, kan sjuksköterskan bli distraherad och ursäkta, sätt någon annans nummer på provröret (ingen avbröt den mänskliga faktorn).

Till vänster - formeln, gjord direkt "från en man", omedelbart på glaset. Till höger är en formel gjord av ett EDTA-rör.

Tja, i formeln som gjordes av blodet som fanns i röret med antikoagulanten (knappt märkbar sprutning av vitt pulver på väggarna inuti röret - salter av EDTA) räknas blodplättarna (för att dubbelklicka vad hemanalysatorn gav ut) fungerar inte bra och leukocyter med erytrocyter speciell "skönhet och fotogenicitet" kommer inte att skilja sig. Därför tror jag att UAC, gjord av manuell teknik, är oförsonligt bättre.

Vad är en leukocytformel och hur den beräknas

En av komponenterna i blodprovet är en leukocytformel. Läkare rekommenderar sin definition för någon patologi, eftersom den är känslig för många patologier. I artikeln kommer vi att analysera alla möjliga förändringar i antalet leukocyter och vad de menar.

Vita blodcellstyper

Fullständigt blodtal består av flera indikatorer. Alla avspeglas i sina egna måttenheter, med symboler i latinska bokstäver.

Därför, när du får ett blodprov (leukogram) på dina händer, är de användbara för någon person att dechiffrera värdena:

Separat inspelad leukocytformel. Det återspeglar förhållandet mellan antalet vita blodkroppar till varandra. Detta är viktigt för en klinisk diagnos eftersom alla leukocyter inte är desamma.

Det finns flera sorter som skiljer sig åt i deras funktioner i människokroppen:

neutrofiler

En av de mest mångsidiga cellerna. Aktiveras av någon inflammation, vare sig bakteriell eller viral. Neutrofiler förstör alla främmande kroppsämnen, och belyser de kemiska komponenter som lockar andra celler av inflammation. Därför utlöses någon inflammatorisk reaktion väsentligen av neutrofiler.

Neutrofila celler är också uppdelade enligt deras mognadsgrad:

Myelocyter och metamyelocyter är mycket unga, unga celler som inte utför några funktioner. En frisk person har inte dem i sitt blod.
Stabceller - mogna celler som alltid finns i blodet. Antalet ökar dramatiskt under infektionens början.
Segmental - de mest mogna, mogna cellerna. De utför alla funktioner för att skydda kroppen som är inneboende i neutrofiler. Segmentella neutrofiler är det senaste steget i utvecklingen av myelocyter.

lymfocyter

Dessa är celler som utför den andra etappen av immunsvaret. De kommer till platsen för inflammation, reagera på kemikalier utsöndrade av neutrofiler.

Lymfocyter utsöndrar flera typer:

B-lymfocyter - skapa antikroppar mot virus- och bakterieinfektioner.
T-lymfocyterhjälpare och mördare - börja arbetet med B-lymfocyter och förstör självständigt virala celler.
Naturmordare kan döda celler som har infekterat viruset eller som har genomgått en tumörändring.

monocyter

Liknande i funktion till neutrofiler. Monocyternas huvudsakliga arbete är att förstöra främmande material. De utför sin uppgift med fagocytos.

Detta är processen med monocytabsorption av en bakterie, virus eller någon annan patogen. Inuti cellen dör detta element, vilket ger monocyter information om dess struktur. I framtiden kommer det att hjälpa B-lymfocyter att utveckla antikroppar mot denna patogen.

Eosinofiler och basofiler

Dessa är celler som är involverade i allergiska reaktioner. Deras antal ökar dramatiskt om en person utvecklar en allergi mot något ämne.

Det beror på de kemiska element som frigör eosinofiler att en person utvecklar symtom på en akut allergisk reaktion:

Ansiktet sväller;
Det finns en hosta eller rinnande näsa;
Hudrödor;
Det finns utslag.

Förutom allergier reagerar eosinofiler på parasiter. Det har visat sig att antalet eosinofiler ökar om det finns en parasitisk infektion i kroppen, såsom Giardia eller opisthorchiasis. Detta beror på reaktionen av eosinofiler till parasitantigener som kommer in i blodet.

Leukocytfunktioner

Leykoformula inte för ingenting består av flera komponenter. Var och en av dessa celler är viktig för att ge kroppen en hälsosam immunitet. Allt börjar med ingreppet av bakterier eller virus i människokroppen. Den patogena mikroben absorberas av neutrofilen, som utövar sin matsmältningsfagocytos.

Efter fagocytos behåller neutrofiler en mikrobiell partikel, som visar den till lymfocyter. T-lymfocyter och B-lymfocyter organiserar tillsammans en attack på patogenen. B-celler skapar en massa antikroppar som är idealiska för denna bakterie. Endast sådana gemensamma åtgärder ger ett immunsvar under varje infektion. Därför är förhållandet mellan leukogramceller så viktigt.

Normala leukogramvärden

I varje laboratorium kan olika värden vara normala, beroende på teknik och reagens som används av teknikerna. Därför bör analysen i dynamisk observation utföras i ett laboratorium. Detta kommer att bevara de korrekta värdena och tydligt spåra dynamiken.

Men det finns genomsnittliga kriterier som kan användas om laboratoriet inte har lämnat uppgifterna.

Antalet celler beror starkt på kön och ålder av personen.

Hur är analysen

Blod för att bestämma antalet leukocyter kan tas på två sätt:

Kapillär - från ett finger.
Venös - från perifer venen.

Analysindikatorer som tas på olika sätt kan variera även från en person. Men vanligtvis överskrider dessa förändringar inte normala värden. Som en metod för att räkna användes en blodmikroskopisk undersökning alltid tidigare. Det utförs av en laboratorie tekniker, räknar antalet celler i synfält under ett mikroskop.

Beräkningen utförs på 100 celler, så det slutliga resultatet är bekvämt att ställa i procent. Innan vi räknar neutrofiler eller andra celler är synfältet mentalt indelat i 3 områden från en kant till en annan.

Idag använder många laboratorier en automatisk analysator. Det här är en apparat som räknar alla möjliga celler som den möter.

När du använder en hematologianalysator kan du se flera celler på en kort tid. Men i kontroversiella fall ges företräde att betrakta under ett mikroskop av en laboratorie tekniker. En person kan identifiera mindre skillnader i utseendet på celler som kan prata om patologi.

Varför bestämma leykoformulyu

Ett stort antal indikatorer leykoformuly gör det möjligt att svara på många sjukdomar. Korrekt beräknad analys i hälsa och sjukdom kommer att vara till stor hjälp för läkaren.

När en läkare skickar för att bestämma antalet leukocyter har han flera mål:

Bistånd i diagnosen;
Bestämning av processens svårighetsgrad eller aktivitet
Dynamik av återhämtning;
Reaktionen eller bristen på drog mot läkemedel;
Tidig upptäckt av komplikationer.

Förändringar i antal och förhållande i leukogram

Vid beräkning av procenttalet av neutrofila celler visas förhållandet mellan mogna och unga leukocytformer. Detta gör att du kan förstå graden av skärpa i processen och dess svårighetsgrad.

Med en ökning av antalet stab och kärnceller i analysen talar de om förändringen av leukocytformeln till vänster, eftersom dessa celler ligger till vänster i formen. Detta talar för ett aktivt immunsvar. I vissa fall kan utseendet på de mest omogna cellerna i det perifera blodet tala för en onkologisk sjukdom.

Tabell över förhållandet mellan neutrofila former i procent av de totala vita blodkropparna.

I kontroversiella fall eller vid kliniska prövningar kan definitionen av leukocytförgiftningsindex (LII) användas. Detta är förhållandet mellan omogna former av neutrofiler, som uppträder vid akut inflammation mot andra celler - lymfocyter, monocyter, eosinofiler.

Indexvärden beräknas utifrån ålder och kön. Det ungefärliga indexnumret är 0,6.

Skälen till ökningen eller minskningen av leukocyter

Ökningen av antalet neutrofiler uppträder när:

Bakteriella infektioner - angina, pyelonefrit, lunginflammation;
Intoxicering av vilken typ som helst;
Ta glukokortikosteroider - prednison
Brännskador
Gangren, hjärtinfarkt.

Minskningen av antalet neutrofiler följer med:

Svåra bakteriella infektioner - brucellos, tuberkulos;
Virala infektioner - mässling, röda hundar;
Påverkan av toxiner på benmärgen;
Strålningssjuka;
Autoimmuna sjukdomar.

Den främsta orsaken till förändringen i antalet lymfocytceller är en annan typ av infektion. B-lymfocyter mognar i benmärgen och T-lymfocyter i tymusen. Denna distinktion betonar att deras funktioner skiljer sig åt. Men i analyserna spelar ingen roll vilken av fraktionerna som ökas. Labbet undersöker det totala antalet lymfocyter.

Lymfocytos eller ett ökat antal lymfocyter uppträder när:

Kroniska bakterieinfektioner - tuberkulos, syfilis, brucellos;
Akuta virussjukdomar - influensa, vattkoppor, mässling;
Tumörer av blodsystemet - lymfom;
Hormonal dysfunktion - hypothyroidism;
Makrocytanemi - folsymptom;
Autoimmuna patologier - systemisk lupus erythematosus.

Ett minskat antal lymfocyter eller lymfocytos åtföljer:

Primär immunbrist - Di Georgie syndrom;
Sekundära immunförsvar - HIV-infektion;
Ta glukokortikosteroider - prednison
Akut bakterieinfektioner - Streptokock lunginflammation;
Toxiska effekter på benmärgen - strålning, tungmetaller.

Monocyter har nästan inget kliniskt värde om de anses individuellt. Därför utvärderas deras förändringar vanligtvis i kombination med andra leukocytindikatorer.

Monocyter stiger vanligtvis när:

Bakteriella infektioner;
Parasitiska invasioner;
Tumörer av blodsystemet.

Minskningen av antalet monocyter finns praktiskt taget inte utan fullständig leukocytopeni. Därför har det inget diagnostiskt värde. Infektiös mononukleos är värt att nämna. Detta är en virusinfektion, vars huvudsakliga kriterium är detektering av mononukleära ämnen i blodet.

Dessa är celler som ser ut som monocyter men är patologiska. Vid en frisk person är detekteringen av mononukleärer i blodet oacceptabelt.

Eosinofiler och basofiler är ett kriterium för allergiska reaktioner och vissa infektionssjukdomar. Beräkningen av deras antal beror också starkt på det totala antalet leukocyter i blodprovet.

Den vanligaste ökningen av antalet eosinofiler förekommer när:

Eosinofilt granulom;
Eosinofil leukemi;
Parasitiska invasioner;
Scarlet feber;
Allergiska reaktioner;
Kronisk dermatos: psoriasis, eksem.

Låga eosinofiler åtföljer:

Ta kortikosteroid läkemedel;
Några allvarliga infektioner, såsom tyfusfeber.

Vad kan leukocyt blodtal berätta?

Blodparametrar karakteriserar människors hälsa och kan i stor utsträckning underlätta diagnosen. Tack vare definitionen av leukocytformeln kan vi anta typ av sjukdom, bedöma kursen, förekomsten av komplikationer och till och med förutsäga resultatet. Och för att förstå förändringar i kroppen kommer att hjälpa till att dechiffrera leukogram.

Vad visar leukocyt blodtalet?

Blood leukocytformeln är förhållandet mellan olika typer av vita blodkroppar, vanligtvis uttryckt som en procentandel. Studien utförs som en del av ett allmänt blodprov.

Vita blodkroppar kallas vita blodkroppar, som representerar kroppens immunförsvar. Deras huvudsakliga funktioner är:

skydd mot mikroorganismer som kan orsaka hälsoproblem
deltagande i de processer som uppträder i kroppen när de utsätts för olika patogena faktorer och orsakar störningar i det normala livet (olika sjukdomar, effekterna av skadliga ämnen, stress).

Följande typer av leukocyter särskiljas:

Eosinofiler. Manifest i allergiska, parasitiska, smittsamma, autoimmuna och onkologiska sjukdomar.
Neutrofiler. Skydda mot infektioner, kunna förstöra virus och bakterier. Klassificeras i:
- myelocyter (nascent) och metamyelocyter (unga - härledda från myelocyter) är frånvarande i blodet hos en frisk person, bildas endast i extrema fall, med de allvarligaste sjukdomarna;
- choke-kodare (ung) - deras antal ökar med bakteriella sjukdomar om segmenterade neutrofiler misslyckas att klara infektionen;
- segmenterade (mogna) - representerade i det största antalet, ge kroppens immunförsvar i ett hälsosamt tillstånd.
Lymfocyter. De är speciella rengöringsmedel: de kan upptäcka, känna igen och förstöra antigener och delta i syntesen av antikroppar (föreningar som kan stimulera lymfoida celler, bilda och reglera kroppens immunreaktion), ge immunförsvaret.
Monocyter. Deras huvudsakliga uppgift är att absorbera och smälta döda (döende eller rester av förstörda) celler, bakterier och andra främmande partiklar.
Basofiler. Funktionerna hos dessa celler är inte fullständigt förstådda. Det är känt att de deltar i allergiska reaktioner, i blodproppsprocesserna aktiveras under inflammation.

Plasmaceller (plasmaceller) är involverade i bildandet av antikroppar och är normalt närvarande i mycket låga mängder endast i barns blod, hos vuxna är de frånvarande och kan endast uppträda vid patologier.

Studien av leukocyternas kvalitativa och kvantitativa egenskaper kan hjälpa till att göra en diagnos, liksom med förändringar i kroppen ökar eller minskar andelen av vissa typer av blodkroppar på grund av en ökning eller minskning i någon grad av andra.

Läkaren föreskriver detta test till:

få en uppfattning om svårighetsgraden av patientens tillstånd, bedöma sjukdomsförloppet eller den patologiska processen, lära sig om förekomsten av komplikationer;
fastställa orsaken till sjukdomen
utvärdera effektiviteten av den föreskrivna behandlingen;
förutsäga resultatet av sjukdomen
i vissa fall utvärdera den kliniska diagnosen.

Teknik för genomförande, räkning och avkodning analys

För att beräkna leukocytformeln med blodsprutning utförs vissa manipuleringar, torkas, behandlas med speciella färgämnen och undersöks under ett mikroskop. Laboratorieassistenten markerar de blodceller som faller inom hans synfält, och gör det tills totalt 100 (ibland 200) celler läggs till.

Distributionen av leukocyter över smältytan är ojämn: de tyngre (eosinofiler, basofiler och monocyter) ligger närmare kanterna, och de lättare (lymfocyterna) ligger närmare centrum.

Vid beräkning kan användas på två sätt:

Schilling metod. Det består i att bestämma antalet leukocyter i fyra områden av smeten.
Filipchenko metod. I detta fall är stroke uppdelat i 3 delar och räknat i en rak tvärlinje från en kant till den andra.

På ett pappersark i motsvarande kolumner anger du numret. Därefter beräknas varje typ av leukocytantal - hur många celler som hittades.

Man bör komma ihåg att räknar celler i ett blodutslag vid bestämning av leukocytformeln är en mycket felaktig metod, eftersom det finns många svår att eliminera faktorer som introducerar ett fel: fel i blodprovtagning, förberedelse och färgning av smet, mänsklig subjektivitet vid tolkning av celler. En egenskap hos vissa celltyper (monocyter, basofiler, eosinofiler) är att de är ojämnt fördelade i smeten.

Om nödvändigt beräknas leukocytindex, vilket representerar förhållandet mellan olika former av leukocyter som ingår i patientens blod och ibland används ESR-indikatorn i formeln (erytrocytsedimenteringshastighet).

Leukocytindex visar graden av berusning och karaktäriserar tillståndet för organismens anpassningspotential - förmågan att anpassa sig till effekterna av toxiska faktorer och hantera dem. De tillåter också:

Leukocytformel

WBC - en indikator innefattande bestämning av de fem huvudtyper av leukocyter (neutrofiler, eosinofiler, basofiler, lymfocyter, monocyter), som utför olika funktioner i kroppen och representerar deras procentuella förhållandet (uttryckt i procent och förändringar i antalet leukocyter är ofta icke-specifika).

Metoder för att bestämma:
• Mikroskopi av ett blodsprut av en laboratoriehandledare med ett antal leukocyter per 100 celler
• Flödescytometri med laserdetektering (automatisk hematologianalysator) - automatisk analys matar ut resultatet som den procentuella andelen neutrofiler, lymfocyter, monocyter, eosinofiler (om något onormalt sker visa blodutstryk under mikroskop hematologist med en ytterligare förfining av leukocytisk formel och beskrivning morfologi cell)

Fördelarna med att räkna leukocytformeln på en hematologianalysator av en läkare:
• hög noggrannhet (analys av mer än 2000 celler, doktorn analyserar 100-200 celler)
• objektivitet
• Hög reproducerbarhet av forskningsresultat på grund av analys av ett stort antal celler, homogeniteten hos det studerade materialet, uteslutning av den subjektiva faktorn

Nackdelar med att räkna leukocytformeln på en hematologianalysator:
• Automatisk räknare inte dela subpopulation av neutrofiler och segmenterad vid stab, men när ett stort antal unga former av neutrofiler (hugg, unga, myelocyter) visar meddelandet "vänstra shift" som är ett krav för räkning av leukocyter under mikroskop

Syftet med studieleukocytformeln:
• bedöma immunitetens tillstånd
• diagnos och differentiell diagnos av leukemi
• bestämma scenen och svårighetsgraden av den smittsamma sjukdomen
• diagnos av allergiska reaktioner och parasitiska invasioner och bedömning av deras svårighetsgrad (antal eosinofiler)
• Differentiell diagnos av virus- och bakterieinfektioner

. Det diagnostiska värdet av leukocytformeln är att det ger en uppfattning om svårighetsgraden av sjukdomen och effektiviteten av behandlingen

. leukocytformeln har åldersegenskaper, därför bör dess förändringar utvärderas från åldersnormens ställning (detta är särskilt viktigt vid undersökning av barn)

Vid bestämning av blodformeln utvärderas förhållandet mellan olika typer av leukocyter och deras morfologi; Denna studie ger mer noggrann information om patientens immunförsvar än att endast bestämma antalet leukocyter. Totalt finns det 5 huvudtyper leukocyter - neutrofiler, eosinofiler, basofiler, lymfocyter och monocyter. Vid beräkning av blodtal bestäms andelen leukocyter av varje typ. Blodformeln reflekterar den relativa mängden av varje typ av leukocyt i blodet. För att bestämma det absoluta antalet leukocyter av varje typ multiplicera deras procentandel med det totala antalet leukocyter.

Allmänna resultat av indikatorer på leukocytformeln hos vuxna, som är närmast observationerna från den hematologiska forskningscentralen för den ryska akademin för medicinska vetenskaper:
• sticka neutrofiler 2-4% (0,080-0,350 x109 / l)
Segmenterade neutrofiler 47 - 67% (2000 - 5 900 x 109 / l)
• eosinofiler 0,5-5,0% (0,020-0,440 x109 / 1)
• basofiler 0-1% (0-0,088 x109 / l)
• lymfocyter 25 - 35% (1000 - 3000 x 109 / l)
• monocyter 2 - 6% (0,080-0,530x 109/1)

Hos barn är antalet neutrofiler något lägre, och lymfocyter och monocyter är högre än hos vuxna. Vidare detekteras yngre neurotrofila celler hos barn under 1 års ålder i blodmetamyelocyterna, vilket utgör 4% hos nyfödda och 0,5% hos barn från första månadens liv. Hos barn under 1 år är plasmaceller som utsöndrar immunoglobuliner närvarande i blodet i en mängd av 0,5%.

. med förändringar i det totala antalet leukocyter, med fokus på procentandelen celler i leukocytformeln kan leda till felaktiga slutsatser; I sådana fall görs bedömningen utifrån det absoluta antalet av varje typ av celler (V109 / l)

Information om den fysiologiska rollen hos vissa typer av leukocyter:
Neutrofiler - Neutrofilernas huvudsakliga funktion - penetration av kroppsvävnader från blodet och förstörelse av främmande, patogena mikroorganismer genom fagocytos (anfall och matsmältning); beroende på graden av mognad och formen av kärnan används perifert blod för att fördela stab (yngre) och segmenterade (mogna) neutrofiler; yngre neutrofila celler - unga (metamyelocyter), myelocyter, promyelocyter - förekommer i det perifera blodet vid patologi och är bevis på stimulering av bildandet av celler av denna art
• Eosinofiler - Eosinofils huvudsakliga funktion är att skydda kroppen mot invasion av mikroorganismer som är större än bakterier (till skillnad från neutrofiler), till exempel parasitära maskar; eosinofiler finns på platsen för inflammation orsakad av och allergiska sjukdomar
• basofiler - en typ av vita blodkroppar som är involverade i allergiska reaktioner; En ökning av antalet celler finns i olika allergiska reaktioner, kroniska och virusinfektioner och kan tillsammans med eosinofili vara ett tecken på kronisk myeloid leukemi. innehåller biologiskt aktiva substanser såsom heparin och histamin (liknande mastceller i bindväven), basofila leukocyter under degranulering initierar utvecklingen av en anafylaktisk överkänslighetsreaktion av omedelbar typ
• Lymfocyter - är immunets huvudceller för bildande av cellulär immunitet; de bildar antikroppar som binder utländska ämnen och leder till förstörelse av celler infekterade med mikroorganismer; de kan "känna igen" och "döda" cancerceller; tillhandahålla förvärvad immunitet (motstånd mot sjukdomen under sekundär kontakt med patogenen)
• monocyter - de största cellerna bland leukocyter, innehåller inte granuler; delta i bildandet och reglering av immunsvaret, utföra funktionen av antigenpresentation till lymfocyter och vara en källa till biologiskt aktiva substanser, inklusive regulatoriska cytokiner; har förmåga att lokal differentiering - är prekursorerna av makrofager (som blir till efter att ha lämnat blodet) - makrofager kan absorbera upp till 100 mikrober medan neutrofiler - endast 20-30; de förekommer i fokus av inflammation efter neutrofiler och uppvisar maximal aktivitet i en sur miljö där neutrofiler förlorar sin aktivitet; i fokus för inflammationsmakrofager fagocytera bakterier och döda vita blodceller, skadade celler av inflammerad vävnad, clearing det inflammatoriska fokus och förbereda det för regenereringen (monocyter - "renhållare" av kroppen, de absorberar bakterier och bakterier, och döda vita blodkroppar, skadade celler av inflammerad vävnad, rengör härden inflammation och förbered den för regenerering)

Förändringar i nivån av enskilda leukocytpopulationer:
• neutrofili - en ökning av det totala antalet leukocyter på grund av neutrofiler
• neutropeni - en minskning av innehållet i neutrofiler
• lymfocytos - en ökning av innehållet av lymfocyter
• lymfopeni - en minskning av innehållet av lymfocyter
• Eosinofili - En ökning av innehållet av eosinofiler
• eosinopeni - en minskning av innehållet av eosinofiler
• monocytos - ökning av innehållet i monocyter
• monopeni (monocytopeni) - en minskning av innehållet av monocyter

Förändringen av antalet neutrofiler
öka:
Infektioner (orsakade av bakterier, svampar, protozoer, rickettsiae, vissa virus, spirocheter)
• inflammatoriska processer (reumatism, reumatoid artrit, pankreatit, dermatit, peritonit, thyroidit)
• tillstånd efter operationen
• ischemisk vävnadsnekros (infarkt av inre organ - myokard, njurar, etc.)
• endogen förgiftning (diabetes mellitus, uremi, eclampsia, hepatocytnekros)
• fysisk stress och känslomässig stress och stressiga situationer: effekterna av värme, kyla, smärta, brännskador och förlossning, under graviditet, med rädsla, ilska, glädje
• onkologiska sjukdomar (tumörer av olika organ)
• ta vissa läkemedel, såsom kortikosteroider, digitalis, heparin, acetylkolin
• Förgiftning med bly, kvicksilver, etylenglykol, insekticider
minskning av:
• vissa infektioner orsakade av bakterier (tyfoid och paratyfus, brucellos), virus (influensavirus, mässling, vattkoppor, hepatit, röda hund), protozoer (malaria), rickettsia (tyfus), långvarig infektion hos äldre och försvagade människor
• blodsjukdomar (hypo- och aplastisk, megaloblastisk och järnbristande anemi, paroxysmal nattlig hemoglobinuri, akut leukemi, hypersplenism)
• medfödd neutropeni (ärftlig agranulocytos)
• anafylaktisk chock
• tyrotoxikos
• exponering för cytostatika, cancer mot cancer
• doserings neutropeni associerad med hyperkänsliga individer till verkan av vissa läkemedel (icke-steroida antiinflammatoriska läkemedel, antiepileptika, antihistaminer, antibiotika, antivirala medel, psykotropa läkemedel, läkemedel som verkar på det kardiovaskulära systemet, diuretika, antidiabetiska läkemedel)

Ändra antalet EOSINOPHIL s
öka:
• allergisk sensibilisering av kroppen (bronkial astma, allergisk rinit, pollinos, atopisk dermatit, eksem, eosinofil granulomatös vaskulit, matallergi)
• läkemedelsallergi (ofta för följande läkemedel - aspirin, aminofyllin, prednison, karbamazepin, penicilliner, kloramfenikol, sulfonamider, tetracykliner, läkemedel mot tuberkulos)
• Hudsjukdomar (eksem, dermatit herpetiformis)
• parasitiska - helminthic och protozoa invasioner (giardiasis, echinococcosis, ascariasis, trichinosis, strongyloidosis, opisthorchosis, toxokaros, etc.)
• akut period av infektionssjukdomar (skarlet feber, kycklingpox, tuberkulos, infektiös mononukleos, gonorré)
• maligna tumörer (särskilt metastatisk och med nekros)
• proliferativa sjukdomar i det hematopoetiska systemet (lymfogranulomatos, akut och kronisk leukemi, lymfom, polycytemi, myeloproliferativa sjukdomar, tillståndet efter splenektomi, hypereosinofilt syndrom)
• inflammatoriska processer i bindväv (periarterit nodosa, reumatoid artrit, systemisk sklerodermi)
Lungsjukdomar - sarkoidos, lung eosinofil lunginflammation, histiocytos från Langerhans-celler, eosinofil pleurisy, lung-eosinofil infiltration (Lefflers sjukdom)
• hjärtinfarkt (negativt symptom)
minskning av:
• Inledningsfasen av inflammatorisk process
• allvarliga purulenta infektioner
• chock, stress
• Förgiftning med olika kemiska föreningar, tungmetaller.

Ändra antalet BASOFILs
öka:
• kronisk myeloid leukemi (eosinofil-basofil association)
Myxedem (hypotyreoidism)
• kycklingpox
• överkänslighet mot mat eller droger;
• Reaktion på införandet av främmande protein
• nephrosis
• kronisk hemolytisk anemi
• tillstånd efter splenektomi
• Hodgkins sjukdom
Behandling med östrogen-, antityroid-läkemedel
• ulcerös kolit

Förändringen av antalet lymfocyter
öka:
• infektionssjukdomar: infektiös mononukleos, viral hepatit, cytomegalovirusinfektion, kikhosta, ARVI, toxoplasmos, herpes, rubella, HIV-infektion
Blodsykdomssjukdomar: akut och kronisk lymfocytisk leukemi; Lymphosarcoma, tung kedjans sjukdom - Franklin sjukdom
• Förgiftning med tetrakloretan, bly, arsenik, koldisulfid
• behandling med läkemedel som levodopa, fenytoin, valproinsyra, narkotiska analgetika
sänkning
Akuta infektioner och sjukdomar
• Miljär tuberkulos
• förlust av lymf genom tarmarna
• lymfogranulomatos
• systemisk lupus erythematosus
• aplastisk anemi
Njurinsufficiens
• Terminalt stadium av onkologiska sjukdomar
• immunbrist (med T-cellbrist)
• strålbehandling
• administrering av läkemedel med cytostatisk effekt (klorambucil, asparaginas), glukokortikoider, administrering av anti-lymfocytiskt serum

Ändra antalet MONOCITES
öka:
Infektioner (viral, svamp, protozoal och rickettsial etiologi) samt återhämtningsperioden efter akuta infektioner
• granulomatos: tuberkulos, syfilis, brucellos, sarkoidos, ulcerös kolit (icke-specifik)
• systemisk kollagenos (systemisk lupus erythematosus), reumatoid artrit, periarterit nodosa
• blodsjukdomar (akut monocytisk och myelomonocytisk leukemi, myeloproliferativa sjukdomar, myelom, lymfom)
• Förgiftning med fosfor, tetrakloretan
minskning av:
• aplastisk anemi (skada på benmärgen)
• hårig cell leukemi
• pyogena infektioner
• förlossning
• operativa insatser
• chockförhållanden
• ta glukokortikoider.

Kärnförskjutningen av leukocytforumet är förändringen i det normala procentuella förhållandet mellan olika grupper av neutrofila leukocyter.

Nukleära neutrofiler skiftar vänster talar om förekomsten av yngre former av neutrofiler i blodet, som händer vid:
Infektionssjukdomar
• inflammatoriska processer
• rake
• Förgiftning

Beroende på typ av kärnväxling:
• regenerativt skifte - antalet stabila och unga neutrofiler ökar mot bakgrund av en allmän ökning av leukocyter - detta är en indikator på ökad benmärgsstärkelse, som observeras vid inflammatoriska och purulenta septiska sjukdomar
• degenerativ skift - en ökning av antalet stabila neutrofiler, utseendet på degenerativa förändringar i cellerna - ett sådant skifte antyder en funktionell inhibering av benmärg, vilken kan uppträda både med en ökning i leukocyter och med en minskning av leukocyter

Degenerativ skift:
• vid generell leukocytos kan det förekomma i: salmonellos, toxisk dysenteri, akut peritonit, uremisk och diabetisk koma
• mot bakgrund av en minskning av leukocyter, händer det vid: virusinfektioner, tyfus paratyphoida sjukdomar

Leukemoidreaktioner kännetecknas av utseendet av omogna former: myelocyter, promyelocyter och till och med myeloblaster mot bakgrund av uttalad leukocytos; Leukemoidreaktioner uppträder i: infektioner, tuberkulos, mag i magen, bröst, tjocktarm.

Förhållandet mellan alla icke-segmenterade leukocyter till segmenterade former kallas neutrofila skjuvindex och bestäms av följande leukocytblodtal:

SHIFT INDEX = (M + S + P) / C = normal 0,05-0,08

där:
• M-myelocyter
• Yu - unga neutrofiler
• P-band
• C-segmenterade neutrofiler

Svårighetsgraden av sjukdomen på skiftindexet:
• svåra grad - index från 1,0 och högre
• medelgrad - index 0,3-1,0
• mild - index inte mer än 0,3

NUKLEÄRA NEUTROFILER SHIFT RIGHT - AMONG NEUTROPHILES OVERCOME Äldre former med 5-6 SEGMENTER INTE AV ORDINARY THREE (Skiftindex - mindre än 0,04)

Ett neutrofilt nukleärt skift uppstår till höger:
• Normalt 20 procent av friska människor
• med addisonobirmeres anemi
• polycytemi
• med strålningssjukdom

Nukleär neutrofilförskjutning till höger i smittsamma och inflammatoriska sjukdomar indikerar en gynnsam kurs.

VIKTIGT REJUVENATION AV CELLS:
• "sprängkris" - förekomsten av endast regionala celler: akut leukemi, metastasering av maligna tumörer, förvärring av kronisk leukemi
• "misslyckande" av leukocytformeln - sprängceller, promyelocyter och mogna celler, inga mellanliggande former: karakteristiska för debut av akut leukemi

referensinformation

Leukocytopoiesis (leukopoiesis) innefattar:
• på myeloidlinjen
- granulocytopoiesis (granulopoiesis)
- monocytopoiesis (monopoiesis)
• på lymfoidlinjen
- lymfocytopoiesis (lymfopoiesis)

Differentiering i myeloidlinjen:
• myeloblast - i granulocytraden är den första morfologiskt urskiljbara cellen; den har en anbud strukturell kärna, enkla nukleoler; formen av kärnan är rund, dimensionerna är något mindre än den för erythroblast; myeloblast skiljer sig från icke-differentierbara blaster från klassen av prekursorceller genom närvaron av granularitet i cytoplasman; Cellformen är ofta rund, platt
• promyelocyt (neutrofilt, eosinofilt och basofilt) - nästa steg i granulocytmognad - den runda eller bönaformiga kärnan av promyelocyt är nästan dubbelt så stor som myeloblastkärnan, även om denna cell inte är polyploid; det ligger ofta excentriskt, och i det kan du se resterna av nukleolen; kromatinstrukturen förlorar redan den känsliga filamentösa strukturen hos sprängcellerna, även om den inte har en grov lekonstruktion; cytoplasmområdet är ungefär lika med kärnområdets yta; cytoplasman är rikligt mättad med grit som har karakteristiska särdrag för varje rad
• "maternal myelocyt" - av alla indikationer motsvarar den beskrivna promyelocyten, men skiljer sig från den i en grovare kärna (i praktiken är denna form inte beaktad, den har inte gått in i myelogrammet) - är en övergångsform från promyelocyt till nästa steg av cellmognad
• myelocyt - är en cell med en rund eller oval, ofta excentriskt lokaliserad kärna som har förlorat några tecken på blaster; cytoplasman är färgad i en grå-blåaktig ton, dess granularitet i neutrofil myelocyt är mindre än den för promyelocyt; cytoplasmens relativa område ökar; eosinofil myelocyt har en karakteristisk orange-röd granularitet av samma typ, basofil myelocyt - en stor polymorf basofil granularitet
• metamyelocyt - karaktäriseras av en bönformad kärnkärna med stor färgkänsla, som vanligtvis ligger excentriskt; Området för dess cytoplasma är större än kärnområdet och cytoplasman innehåller samma granularitet som myelocyt, men i neutrofila metamyelocyter är det mindre än i myelocyter.

Differentiering i lymfoidlinjen:
T-lymfocytpopulationen
• lymfoblast - i lymfocytiska serien (stor lymfocyt) har alla egenskaper hos en odefinierad blast, men kännetecknas ibland av enskilda stora nukleoler; detektering i ett smet från en lymfkörtel eller mjälte av en grusfri blast gör det möjligt att tillskriva det till lymfoblaster; ett försök att differentiera en lymfoblast, en monoblast och en odifferentierad sprängning av kärnans storlek och form, genom kanten av cytoplasmens bredd, har ingen framgång, eftersom lymfoblast som påverkas av antigenstimulering kan genomgå en rad olika förändringar
• Prolymphocyt - har en relativt homogen struktur av kärnan, ofta nukleolrester, men den har inte den stora kromatin grovhet som är karakteristisk för en mogen lymfocyt
B-lymfocytpopulationen
• plasmablast - har en blastkärna, kornig violettblå cytoplasma
• protoplasmocyt - i jämförelse med plasmaceller har den en mer tät kärna, vanligen lokaliserad excentriskt, med en relativt större cytoplasma av blåviolett färg.
• Plasmacell - kännetecknad av en hjulformad tät kärna, liggande excentrisk; cytoplasma - blåviolett, ibland med flera azurofila rödaktiga granuler; och i norm och i patologi kan det vara flera kärnor

Steg av blodanalys för att räkna leukocytformeln:
1. Blodsprut på en glasskiva. Noggrant tvättat och avfettat glas (dess kant) berör en bloddroppe på injektionsstället. Smörj gör slipglas, lägg det i en vinkel på 45 ° till bilden framför droppen. Efter att ha tagit glaset till denna droppe, väntar de tills blodet sprider sig längs kanten, sedan med en snabb och enkel rörelse utför de slipglaset framåt och tar inte bort det från motivet innan det torkar ut hela droppen. Ett riktigt smet har en gulaktig färg (tunn), når inte kanterna på glaset och slutar i ett spår (mustasch).
2. Fixering. Den bästa fixeringen uppnås i absolut metylenalkohol (3-5 minuter) eller i en blandning av Nikiforov med lika delar av absolut etanol och eter (30 minuter).
3. Färgning. De huvudsakliga hematologiska färgerna innefattar metylenblå och dess derivat - azurblå I (metylen azurblå) och azurblå II (en blandning av lika delar azurblå I och metylenblå), till surt vattenlösligt gult eosin.
- Romanovsky-Giemsa-färg (fabriksgjord) har följande sammansättning: Azur II - 3 g, vattenlöslig gul eosin - 0,8 g, metylalkohol - 250 ml och glycerin - 250 ml. Arbetsfärglösningen framställs med en hastighet av 1,5-2 droppar av den färdiga färgen per 1 ml destillerat vatten. Färgen hälls på smeten med högsta möjliga lager, färgtiden är 30-35 minuter. Efter denna period tvättas pannorna med vatten och torkas i luft. Med denna metod kan kärnan vara väl differentierad, men cytoplasmens neutrofila granularitet är mycket sämre, så den används ofta för att färglägga ett perifert blodsprut.
- Ett färdigt färgämne, en maj-Grunwald fixativ, som är en lösning av eosinmetylenblå i metylenalkohol, pipetteras på ett fast smear i 3 minuter. Efter 3 minuter tillsätts en lika stor mängd destillerat vatten till färgen som täcker lösningen och färgen fortsätter under ytterligare 1 minut. Därefter tvättas färgen och smeten torkas i luften. Därefter ommålas det torkade smetverket med en nyberedd vattenlösning av Romanovsky-färg under 8-15 minuter. Denna metod anses vara den bästa, speciellt för uttryckningar av murgpunkta.